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蝮蛇蛇毒蛋白C激活物的纯化鉴定及其抗心血管氧化应激损伤的作用机制

摘要第5-7页
abstract第7-9页
缩写表(Abbreviations)第13-15页
第一章 前言第15-18页
第二章 蝮蛇毒PCA的分离纯化及初步生物学特性鉴定第18-25页
    材料与方法第18-22页
        1 实验材料第18-19页
            1.1 实验标本第18页
            1.2 主要实验药品及试剂第18-19页
            1.3 实验仪器第19页
        2 实验方法第19-22页
            2.1 AKTAprime蛋白质纯化系统分离纯化第19-20页
            2.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳第20-21页
            2.3 发色底物法(Chromogenic Substrate Assay)第21-22页
            2.4 血小板聚集率的测定第22页
    结果第22-23页
        1.1 蝮蛇毒PCA的分离纯化第22-23页
        1.2 AHV-PCA经SDS-PAGE电泳结果第23页
        1.3 AHV-PCA经LC-MS鉴定结果第23页
    讨论第23-25页
第三章 蝮蛇毒PCA对H_2O_2诱导的内皮细胞损伤保护效应及可能机制第25-44页
    材料与方法第26-35页
        1 实验材料第26-27页
            1.1 人脐静脉内皮细胞第26页
            1.2 主要实验药品及试剂第26-27页
            1.3 实验仪器第27页
        2 实验方法第27-34页
            2.1 人脐静脉内皮细胞体外培养第29页
            2.2 实验设计与分组第29页
            2.3 CCK-8法测定细胞增殖活力第29-30页
            2.4 AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡第30页
            2.5 流式检测细胞内ROS第30页
            2.6 IL-1和NO水平检测第30-31页
            2.7 Rea-l time PCR检测P38-MAPK和eNOSmRNA的表达第31-33页
            2.8 蛋白免疫印迹检测P38-MAPK及eNOS蛋白表达第33-34页
        3 统计学处理第34-35页
    结果第35-41页
        1 PCA对血管内皮细胞形态的影响第35页
        2 CCK-8药物敏感性实验第35-36页
        3 流式细胞仪检测内皮细胞凋亡第36-38页
        4 PCA对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞ROS水平的影响第38-39页
        5 PCA对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞IL-1表达的影响第39页
        6 PCA对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞p38-MAPK、eNOS表达和NO水平的影响第39-41页
    讨论第41-44页
第四章 蝮蛇毒PCA对糖尿病大鼠心肌纤维化的抑制效应及可能机制第44-59页
    材料与方法第46-53页
        1 实验材料第46-47页
            1.1 实验动物第46页
            1.2 主要实验药品及试剂第46页
            1.3 实验仪器第46-47页
        2 实验方法第47-53页
            2.1 糖尿病大鼠模型制备与分组第47页
            2.2 样品采集第47-48页
            2.3 心肌标本处理第48页
            2.4 病理形态学观察第48-49页
            2.5 酶联免疫(ELISA)法TGF-β1及IL-1β的含量第49-50页
            2.6 实时定量(Q-PCR)检测MMP-2和TIMP-2mRNA表达第50-52页
            2.7 Western blotting检测MMP-2和TIMP-2蛋白表达水平第52-53页
        3 统计学处理第53页
    结果第53-56页
        1 各组大鼠空腹血糖(FBG)、体重、左心室重量指数的改变第53页
        2 各组大鼠TGF-β1、IL-1β含量变化第53-54页
        3 各组大鼠心肌形态病理学改变第54-55页
        4 PCA对大鼠心肌组织胶原纤维的影响第55页
        5 PCA对大鼠心肌MMP-2、TIMP-2 mRNA、蛋白的影响第55-56页
    讨论第56-59页
第五章 全文总结第59-61页
    主要研究结论第59页
    本研究的主要创新点第59-60页
    研究展望第60-61页
参考文献第61-68页
第六章 综述 蛇毒有效成分的药理研究进展及其临床应用第68-77页
    1 蛇毒成分的构成第68-71页
        1.1 蛇毒酶第69页
        1.2 生长因子第69-70页
        1.3 神经毒性多肽第70页
        1.4 膜活性多肽第70页
        1.5 蛇毒去整合蛋白第70-71页
    2 蛇毒的临床应用研究第71-72页
        2.1 防治心血管疾病治疗(抗凝、止血、降压)第71页
        2.2 抗炎、镇痛,免疫调节第71-72页
        2.3 抗肿瘤治疗第72页
    3 蛇毒的开发前景第72-73页
    参考文献第73-77页
致谢第77-78页
附:博士在读期间发表论文及获奖情况第78页

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