中文摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
第一章 前言 | 第8-26页 |
1.1 疾病的基因治疗研究 | 第8-13页 |
1.1.1 基因载体的研究 | 第8-9页 |
1.1.2 基因载体细胞吸收的体外屏障 | 第9-12页 |
1.1.3 基因载体的体内屏障 | 第12-13页 |
1.2 穿膜肽的功能研究简介 | 第13-16页 |
1.2.1 细胞穿膜肽的分类 | 第13-14页 |
1.2.2 穿膜肽的跨膜机制 | 第14-16页 |
1.2.3 穿膜肽在基因运输中的应用 | 第16页 |
1.3 抗菌肽的功能研究简介 | 第16-21页 |
1.3.1 抗菌肽的分类 | 第17-19页 |
1.3.2 抗菌肽的作用机制 | 第19-21页 |
1.3.3 抗菌肽Melittin | 第21页 |
1.4 抗菌肽与穿膜肽相似应用研究 | 第21-26页 |
1.4.1 CPPs和AMPs的作用机制 | 第21-23页 |
1.4.2 AMPs作为CPPs的应用 | 第23-24页 |
1.4.3 CPPs作为AMPs的应用 | 第24-26页 |
第二章 抗菌肽18-Mel、18-rMel在基因转染中的应用研究 | 第26-34页 |
2.1 立题依据 | 第26-27页 |
2.2 实验材料和仪器 | 第27-29页 |
2.2.1 多肽合成所需试剂 | 第27-28页 |
2.2.2 细胞实验所需试剂 | 第28页 |
2.2.3 实验所用试剂盒 | 第28页 |
2.2.4 实验所需仪器 | 第28-29页 |
2.3 实验方法步骤 | 第29-34页 |
2.3.1 多肽合成与纯化、表征 | 第29页 |
2.3.2 PGL3、EGFP、P53质粒的提取 | 第29-30页 |
2.3.3 肽/质粒复合物的形成及表征 | 第30页 |
2.3.4 EB排斥实验验证复合物的凝聚 | 第30页 |
2.3.5 细胞培养 | 第30-31页 |
2.3.6 细胞毒性(MTT测定)分析 | 第31页 |
2.3.7 乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞膜的完整性 | 第31页 |
2.3.8 体外转染效率检测 | 第31-32页 |
2.3.9 内吞作用机制研究 | 第32页 |
2.3.10 EGFP表达分析 | 第32页 |
2.3.11 细胞吸收检测 | 第32页 |
2.3.12 细胞吸收机制检测 | 第32-33页 |
2.3.13 钙黄绿素释放 | 第33页 |
2.3.14 肽/P53质粒的抗增殖分析 | 第33页 |
2.3.15 P53蛋白表达分析 | 第33-34页 |
第三章 结果与分析 | 第34-47页 |
3.1 肽/质粒复合物的表征 | 第34-36页 |
3.1.1 EB排斥实验验证肽与pGL3质粒形成复合物的能力 | 第34页 |
3.1.2 肽/质粒复合物的粒子大小和ζ-电势 | 第34-36页 |
3.2 肽/质粒复合物的体外转染 | 第36-37页 |
3.2.1 Luciferase转染实验验证肽/质粒复合物的体外转染效率 | 第36页 |
3.2.2 EGFP质粒分析肽/质粒复合物的体外转染效率 | 第36-37页 |
3.3 肽/质粒复合物的细胞毒性 | 第37-38页 |
3.4 肽质粒复合物的细胞吸收及机制研究 | 第38-40页 |
3.4.1 肽/质粒复合物的细胞吸收 | 第38-39页 |
3.4.2 肽/质粒复合物的细胞吸收途径 | 第39-40页 |
3.5 18-Mel、18-rMel的胞内体裂解活性 | 第40-42页 |
3.5.1 氯喹验证肽/质粒复合物裂解胞内体的活性 | 第40-41页 |
3.5.2 LDH实验验证肽质粒复合物裂解胞内体的活性 | 第41页 |
3.5.3 钙黄绿素实验验证肽/质粒复合物裂解胞内体的活性 | 第41-42页 |
3.6 十八烷酰肽/p53质粒复合物的抗增殖作用 | 第42-44页 |
3.7 讨论 | 第44-47页 |
参考文献 | 第47-56页 |
附录 | 第56-67页 |
在学期间的研究成果和获奖情况 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |