| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 弓形虫病及其危害 | 第12页 |
| 1.2 抗弓形虫药物研究 | 第12-13页 |
| 1.3 自噬的生物学作用 | 第13-14页 |
| 1.4 弓形虫自噬研究现状 | 第14-15页 |
| 1.5 ATG6的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.6 CRISPR/Cas9技术 | 第16-18页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 TgATG6多克隆抗体制备及亚细胞定位分析 | 第19-31页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 TgATG6氨基酸序列分析 | 第20页 |
| 2.2.2 原核表达载体 4T1TgATG6的构建 | 第20-23页 |
| 2.2.3 ATG6蛋白的原核表达及纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.4 TgATG6多克隆抗体制备 | 第24页 |
| 2.2.5 TgATG6多克隆抗体检测TgATG6基因缺失株 | 第24页 |
| 2.2.6 TgATG6稳定表达质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.7 TgATG6稳定表达虫株的构建及筛选 | 第24-25页 |
| 2.2.8 IFA检测TgATG6亚细胞定位 | 第25页 |
| 2.2.9 IFA检测自噬诱导后TgATG6的亚细胞定位 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 TgATG6进化分析 | 第25-26页 |
| 2.3.2 TgATG6重组蛋白的原核表达 | 第26页 |
| 2.3.3 TgATG6多克隆抗体的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 TgATG6稳定表达虫株的构建与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 TgATG6在细胞内虫体的亚细胞定位 | 第28-29页 |
| 2.3.6 TgATG6在饥饿虫体的亚细胞定位 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 TgATG6基因缺失对虫株生长特性的影响 | 第31-39页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 TgATG6敲除质粒的构建 | 第32页 |
| 3.2.2 TgATG6敲除虫株的构建、筛选及鉴定 | 第32页 |
| 3.2.3 TgATG6敲除虫株增殖水平的检测 | 第32-33页 |
| 3.2.4 TgATG6敲除虫株复制水平的检测 | 第33页 |
| 3.2.5 TgATG6敲除虫株侵入水平检测 | 第33页 |
| 3.2.6 TgATG6敲除虫株毒力检测 | 第33页 |
| 3.2.7 统计学分析 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 构建TgATG6敲除质粒 | 第34页 |
| 3.3.2 构建TgATG6敲除虫株及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 TgATG6基因缺失对虫株增殖水平影响 | 第35-36页 |
| 3.3.4 TgATG6基因缺失对虫株侵入细胞能力影响 | 第36-37页 |
| 3.3.5 TgATG6基因缺失对虫株毒力影响 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 弓形虫TgATG8-PE检测方法的建立 | 第39-44页 |
| 4.1 材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第39页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.2 方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 TgATG8抗体制备 | 第40页 |
| 4.2.2 多克隆抗体检测胞外RH虫株的内源性TgATG8 | 第40页 |
| 4.2.3 多克隆抗体检测胞内RH虫株的内源性TgATG8 | 第40页 |
| 4.2.4 IFA检测胞内RH虫株的内源性TgATG8定位 | 第40-41页 |
| 4.2.5 IFA检测饥饿RH虫株的内源性TgATG8定位 | 第41页 |
| 4.3 实验结果 | 第41-43页 |
| 4.3.1 TgATG8重组蛋白的原核表达 | 第41页 |
| 4.3.2 ATG8多克隆抗体的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 Western blotting检测TgATG8-PE | 第42-43页 |
| 4.3.4 IFA检测TgATG8在弓形虫体内的定位 | 第43页 |
| 4.4 讨论 | 第43页 |
| 4.5 小结 | 第43-44页 |
| 第五章 全文总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
