| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 赤潮概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 赤潮的定义及危害 | 第12页 |
| 1.1.2 赤潮的形成因素 | 第12-13页 |
| 1.2 赤潮藻的检测 | 第13-15页 |
| 1.2.1 传统检测技术 | 第13页 |
| 1.2.2 赤潮藻检测的分子技术 | 第13-14页 |
| 1.2.3 滚环扩增技术 | 第14页 |
| 1.2.4 基因芯片技术 | 第14-15页 |
| 1.3 基因芯片检测技术的国内外研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 基因芯片检测技术的国内研究进展 | 第15页 |
| 1.3.2 基因芯片检测技术的国外研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 本课题研究内容及意义 | 第16-19页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第16-17页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第17-19页 |
| 第2章 用于膜分类芯片检测研究目标藻种的鉴定 | 第19-33页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 研究藻种与培养条件 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2.3 溶液及培养基的配制 | 第20页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.5 基因组DNA的提取及质量检测 | 第21页 |
| 2.2.6 目标藻LSU rDNA序列 的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.7 PCR扩增产物的纯化回收 | 第22页 |
| 2.2.8 载体的连接及转化 | 第22页 |
| 2.2.9 阳性克隆菌株的筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.10 序列分析 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-31页 |
| 2.3.0 基因组DNA的提取结果 | 第23-24页 |
| 2.3.1 基因组DNA的质量检测结果 | 第24页 |
| 2.3.2 LSU rDNA D1–D2区基因的扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.3 PCR产物的纯化结果 | 第25页 |
| 2.3.4 菌落PCR结果 | 第25-26页 |
| 2.3.5 质粒的提取 | 第26页 |
| 2.3.6 质粒双酶切验证 | 第26-27页 |
| 2.3.7 目标序列的测序及比对结果 | 第27-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第3章 PLP、通用RCA引物及分类探针的设计 | 第33-47页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 材料与方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂及仪器 | 第33页 |
| 3.2.3 通用RCA引物的设计 | 第33-34页 |
| 3.2.4 分类探针的设计 | 第34页 |
| 3.2.5 PLP的设计 | 第34-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-46页 |
| 3.3.1 RCA通用引物的设计 | 第38-39页 |
| 3.3.2 分类探针的设计 | 第39页 |
| 3.3.3 PLP T1 T2臂的设计 | 第39-43页 |
| 3.3.4 PLP的设计 | 第43-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 第4章 RCA技术结合试纸法对海洋卡盾藻的检测 | 第47-63页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-53页 |
| 4.2.1 藻种及培养条件 | 第47-48页 |
| 4.2.2 试剂及仪器 | 第48页 |
| 4.2.3 海洋卡盾藻RCA体系的建立 | 第48页 |
| 4.2.4 海洋卡盾藻PLP特异性测试 | 第48-49页 |
| 4.2.5 海洋卡盾藻RCA体系的优化 | 第49-50页 |
| 4.2.6 试纸条法检测体系的建立 | 第50-51页 |
| 4.2.7 海洋卡盾藻分类探针的特异性测试 | 第51-52页 |
| 4.2.8 质粒灵敏度测试 | 第52页 |
| 4.2.9 模拟自然水样测试 | 第52-53页 |
| 4.3 结果 | 第53-61页 |
| 4.3.1 海洋卡盾藻RCA体系的建立及优化 | 第53-56页 |
| 4.3.2 海洋卡盾藻PLP及分类探针的特异性测试 | 第56-58页 |
| 4.3.3 质粒灵敏度测试结果 | 第58-60页 |
| 4.3.4 模拟自然水样检测结果 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.6 小结 | 第62-63页 |
| 第5章 RCA-膜分类芯片检测技术的建立及RCA反应条件的优化 | 第63-76页 |
| 5.1 前言 | 第63页 |
| 5.2 材料与方法 | 第63-66页 |
| 5.2.1 实验藻种与培养条件 | 第63页 |
| 5.2.2 主要试剂及仪器 | 第63-64页 |
| 5.2.3 多重RCA体系的建立 | 第64页 |
| 5.2.4 多重RCA体系的优化及简化 | 第64页 |
| 5.2.5 PLP特异性测试 | 第64页 |
| 5.2.6 分类探针特异性测试 | 第64-65页 |
| 5.2.7 RCA-膜分类芯片检测技术的建立 | 第65-66页 |
| 5.3 结果 | 第66-74页 |
| 5.3.1 多重RCA体系的建立 | 第66-67页 |
| 5.3.2 多重RCA体系的优化及简化实验结果 | 第67-70页 |
| 5.3.4 PLP特异性测试 | 第70-73页 |
| 5.3.5 分类探针的特异性测试 | 第73-74页 |
| 5.3.6 RCA-膜分类芯片检测技术的建立 | 第74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-75页 |
| 5.5 小结 | 第75-76页 |
| 第6章 膜分类芯片检测技术的优化 | 第76-84页 |
| 6.1 前言 | 第76页 |
| 6.2 材料与方法 | 第76-78页 |
| 6.2.1 实验藻种与培养条件 | 第76页 |
| 6.2.2 主要试剂及仪器 | 第76页 |
| 6.2.3 制备膜分类芯片 | 第76-77页 |
| 6.2.4 制备生物素标记的RCA产物 | 第77页 |
| 6.2.5 探针固定时间优化 | 第77页 |
| 6.2.6 探针上样量优化 | 第77页 |
| 6.2.7 RCA产物浓度优化 | 第77页 |
| 6.2.8 杂交时间优化 | 第77-78页 |
| 6.2.9 杂交温度优化 | 第78页 |
| 6.2.10 洗膜温度优化 | 第78页 |
| 6.2.11 杂交图片的分析 | 第78页 |
| 6.3 结果 | 第78-83页 |
| 6.3.1 探针固定时间优化结果 | 第78页 |
| 6.3.2 探针上样量优化结果 | 第78-80页 |
| 6.3.3 RCA产物反应浓度优化结果 | 第80页 |
| 6.3.4 杂交时间优化结果 | 第80-81页 |
| 6.3.5 杂交温度优化结果 | 第81页 |
| 6.3.6 洗膜温度优化结果 | 第81-83页 |
| 6.4 讨论 | 第83页 |
| 6.5 小结 | 第83-84页 |
| 第7章 RCA-膜分类芯片检测技术的灵敏度测试及实用性验证 | 第84-92页 |
| 7.1 前言 | 第84页 |
| 7.2 材料与方法 | 第84-86页 |
| 7.2.1 实验藻种与培养条件 | 第84页 |
| 7.2.2 主要试剂及仪器 | 第84页 |
| 7.2.3 质粒的制备与梯度稀释 | 第84-85页 |
| 7.2.4 PCR与RCA标记 | 第85页 |
| 7.2.5 PCR分类探针的设计 | 第85页 |
| 7.2.6 PCR/RCA—膜分类芯片检测技术的质粒灵敏度测试 | 第85-86页 |
| 7.2.7 模拟自然水样测试 | 第86页 |
| 7.3 结果 | 第86-91页 |
| 7.3.1 PCR分类探针的设计 | 第86-87页 |
| 7.3.2 PCR和RCA质粒灵敏度测试 | 第87页 |
| 7.3.3 PCR与RCA膜分类芯片质粒灵敏度比较 | 第87-89页 |
| 7.3.4 模拟自然水样测试结果 | 第89-91页 |
| 7.4 讨论 | 第91页 |
| 7.5 小结 | 第91-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及其他成果 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
