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南蛇藤茎提取物调控Notch1抑制肝癌血管拟态的作用及机制

中文摘要第3-7页
英文摘要第7-11页
符号说明第17-20页
引言第20-29页
    参考文献第24-29页
第一部分 Notch1在肝癌组织中的表达及其与血管拟态的关系第29-48页
    1 材料第29-30页
        1.1 肝癌组织标本来源第29页
        1.2 临床病理资料第29页
        1.3 主要实验试剂第29-30页
        1.4 主要仪器第30页
        1.5 主要试剂配制第30页
    2 方法第30-33页
        2.1 肝癌组织免疫组化染色第30-31页
            2.1.1 实验步骤第30-31页
            2.1.2 免疫组化结果判断第31页
        2.2 PAS-CD34双染第31-32页
        2.3 RT-PCR扩增分析第32-33页
            2.3.1 引物设计第32页
            2.3.2 组织mRNA提取第32页
            2.3.3 mRNA含量检测第32页
            2.3.4 cDNA合成第32-33页
            2.3.5 RT-PCR扩增第33页
            2.3.6 分析处理第33页
        2.4 结果统计第33页
    3 结果第33-44页
        3.1 肝癌组织样本的收集与分析第33-35页
        3.2 Notch1在肝癌组织中表达升高第35-37页
        3.3 VM与标本特征的相关性第37-39页
        3.4 VM与肝癌组织中Notch、Hes1的相关性第39-40页
        3.5 Notch1、Hes1的表达与肝癌术后早期复发相关第40-41页
        3.6 VM与肝癌术后的早期复发相关第41-42页
        3.7 肝癌组织中上皮间质转化标志物与VM相关第42-44页
    4 讨论第44-45页
    5 参考文献第45-48页
第二部分 Notch1对肝癌细胞体外血管拟态的影响第48-69页
    1 材料第48-51页
        1.1 细胞株第48页
        1.2 慢病毒载体第48页
        1.3 实验试剂第48-49页
        1.4 主要实验仪器第49-50页
        1.5 主要试剂配制第50-51页
            1.5.1 细胞培养主要试剂配方第50页
            1.5.2 Western blot主要试剂配方第50-51页
    2 实验方法第51-55页
        2.1 细胞培养第51页
        2.2 稳定过表达Notch1肝癌细胞株建立第51-52页
        2.3 稳定低表达Notch1肝癌细胞株建立第52页
        2.4 CCK-8分析第52页
        2.5 Transwell小室侵袭实验第52页
        2.6 体外血管拟态形成实验第52页
        2.7 细胞骨架染色第52-53页
        2.8 实时荧光PCR实验第53-54页
        2.9 Western blot实验第54-55页
        2.10 统计方法第55页
    3 结果第55-63页
        3.1 目的细胞株的选择第55-56页
        3.2 稳定过表达及稳定低表达Notch1细胞株的构建第56-57页
        3.3 调控Notch1对肝癌细胞体外侵袭及血管拟态的影响第57-58页
        3.4 调控Notch1对肝癌细胞表型的影响第58-59页
        3.5 调控Notch1对肝癌细胞骨架的影响第59-60页
        3.6 Notch1参与TGF-β1诱导的肝癌细胞侵袭增强及血管拟态第60-61页
        3.7 敲低Notch1对TGF-β1诱导的肝癌细胞上皮间质转化的影响第61-62页
        3.8 敲低Notch1对TGF-β1诱导的肝癌细胞骨架重塑的影响第62-63页
    4 讨论第63-65页
    5 参考文献第65-69页
第三部分 Notch1在人肝癌裸鼠皮下移植瘤内VM形成中的作用第69-88页
    1 材料第69-71页
        1.1 细胞株和实验动物第69页
            1.1.1 细胞株第69页
            1.1.2 实验动物第69页
        1.2 实验试剂第69-70页
        1.3 主要实验仪器第70-71页
        1.4 主要试剂配制第71页
            1.4.1 细胞培养主要试剂配方第71页
            1.4.2 电子染色液配制第71页
    2 方法第71-74页
        2.1 细胞培养第71页
        2.2 GFP标记细胞第71页
        2.3 人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立第71页
        2.4 观察指标第71页
        2.5 石蜡切片的制作第71-72页
        2.6 苏木精-伊红染色(H&E染色)第72页
        2.7 免疫组织化学染色第72-73页
        2.8 PAS-CD34双染色第73页
        2.9 活体动物荧光成像第73页
        2.10 透射电镜扫描(TEM)第73-74页
        2.11 统计方法第74页
    3 结果第74-81页
        3.1 四种细胞的成瘤结果及皮下移植瘤的生长第74-76页
        3.2 四种皮下移植瘤的H&E染色观察第76-77页
        3.3 四种细胞皮下移植瘤的PAS-CD34双染第77-78页
        3.4 四种细胞皮下移植瘤中VM的透射电镜观察第78-79页
        3.5 移植瘤中上皮间质转化标记的表达第79-81页
    4 讨论第81-83页
    5 参考文献第83-88页
第四部分 南蛇藤茎提取物调控Notch1抑制肝癌的VM第88-115页
    1 材料第88-91页
        1.1 药品第88页
        1.2 细胞株和实验动物第88-89页
            1.2.1 细胞株第88-89页
            1.2.2 实验动物第89页
        1.3 实验试剂第89-90页
        1.4 主要实验仪器第90-91页
        1.5 主要试剂配制第91页
    2 方法第91-94页
        2.1 药物准备第91-92页
            2.1.1 南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(COE)第91-92页
            2.1.2 DAPT第92页
        2.2 细胞培养第92页
        2.3 CCK-8分析第92页
        2.4 活细胞工作站观察第92页
        2.5 Transwell小室侵袭实验第92-93页
        2.6 体外VM形成实验第93页
        2.7 细胞骨架染色第93页
        2.8 实时荧光PCR第93页
        2.9 Western blot实验第93-94页
        2.10 人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立第94页
        2.11 实验分组及给药第94页
        2.12 观察指标第94页
        2.13 石蜡切片的制作第94页
        2.14 苏木精-伊红染色(H&E染色)第94页
        2.15 免疫组织化学染色第94页
        2.16 PAS-CD34双染色第94页
        2.17 活体荧光成像第94页
        2.18 透射电镜扫描第94页
        2.19 统计方法第94页
    3 结果第94-107页
        3.1 COE抑制肝癌细胞的体外增殖第95-96页
        3.2 COE抑制肝癌细胞的体外侵袭第96-98页
        3.3 COE抑制肝癌细胞的体外VM第98-100页
        3.4 COE抑制肝癌细胞Notch1、Hes1的表达第100页
        3.5 COE抑制肝癌细胞VM过程中的上皮间质转化第100-103页
        3.6 COE抑制MHCC97-H裸鼠皮下移植瘤的生长第103-104页
        3.7 COE抑制MHCC97-H裸鼠皮下移植瘤内VM第104-106页
        3.8 COE下调移植瘤内Notch1、Hes1的表达第106页
        3.9 COE抑制移植瘤内EMT标记蛋白表达第106-107页
    4 讨论第107-110页
    5 参考文献第110-115页
文献综述第115-134页
    参考文献第123-134页
攻读学位期间发表的学术论文目录第134-135页
致谢第135-136页

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