中文摘要 | 第3-7页 |
英文摘要 | 第7-11页 |
符号说明 | 第17-20页 |
引言 | 第20-29页 |
参考文献 | 第24-29页 |
第一部分 Notch1在肝癌组织中的表达及其与血管拟态的关系 | 第29-48页 |
1 材料 | 第29-30页 |
1.1 肝癌组织标本来源 | 第29页 |
1.2 临床病理资料 | 第29页 |
1.3 主要实验试剂 | 第29-30页 |
1.4 主要仪器 | 第30页 |
1.5 主要试剂配制 | 第30页 |
2 方法 | 第30-33页 |
2.1 肝癌组织免疫组化染色 | 第30-31页 |
2.1.1 实验步骤 | 第30-31页 |
2.1.2 免疫组化结果判断 | 第31页 |
2.2 PAS-CD34双染 | 第31-32页 |
2.3 RT-PCR扩增分析 | 第32-33页 |
2.3.1 引物设计 | 第32页 |
2.3.2 组织mRNA提取 | 第32页 |
2.3.3 mRNA含量检测 | 第32页 |
2.3.4 cDNA合成 | 第32-33页 |
2.3.5 RT-PCR扩增 | 第33页 |
2.3.6 分析处理 | 第33页 |
2.4 结果统计 | 第33页 |
3 结果 | 第33-44页 |
3.1 肝癌组织样本的收集与分析 | 第33-35页 |
3.2 Notch1在肝癌组织中表达升高 | 第35-37页 |
3.3 VM与标本特征的相关性 | 第37-39页 |
3.4 VM与肝癌组织中Notch、Hes1的相关性 | 第39-40页 |
3.5 Notch1、Hes1的表达与肝癌术后早期复发相关 | 第40-41页 |
3.6 VM与肝癌术后的早期复发相关 | 第41-42页 |
3.7 肝癌组织中上皮间质转化标志物与VM相关 | 第42-44页 |
4 讨论 | 第44-45页 |
5 参考文献 | 第45-48页 |
第二部分 Notch1对肝癌细胞体外血管拟态的影响 | 第48-69页 |
1 材料 | 第48-51页 |
1.1 细胞株 | 第48页 |
1.2 慢病毒载体 | 第48页 |
1.3 实验试剂 | 第48-49页 |
1.4 主要实验仪器 | 第49-50页 |
1.5 主要试剂配制 | 第50-51页 |
1.5.1 细胞培养主要试剂配方 | 第50页 |
1.5.2 Western blot主要试剂配方 | 第50-51页 |
2 实验方法 | 第51-55页 |
2.1 细胞培养 | 第51页 |
2.2 稳定过表达Notch1肝癌细胞株建立 | 第51-52页 |
2.3 稳定低表达Notch1肝癌细胞株建立 | 第52页 |
2.4 CCK-8分析 | 第52页 |
2.5 Transwell小室侵袭实验 | 第52页 |
2.6 体外血管拟态形成实验 | 第52页 |
2.7 细胞骨架染色 | 第52-53页 |
2.8 实时荧光PCR实验 | 第53-54页 |
2.9 Western blot实验 | 第54-55页 |
2.10 统计方法 | 第55页 |
3 结果 | 第55-63页 |
3.1 目的细胞株的选择 | 第55-56页 |
3.2 稳定过表达及稳定低表达Notch1细胞株的构建 | 第56-57页 |
3.3 调控Notch1对肝癌细胞体外侵袭及血管拟态的影响 | 第57-58页 |
3.4 调控Notch1对肝癌细胞表型的影响 | 第58-59页 |
3.5 调控Notch1对肝癌细胞骨架的影响 | 第59-60页 |
3.6 Notch1参与TGF-β1诱导的肝癌细胞侵袭增强及血管拟态 | 第60-61页 |
3.7 敲低Notch1对TGF-β1诱导的肝癌细胞上皮间质转化的影响 | 第61-62页 |
3.8 敲低Notch1对TGF-β1诱导的肝癌细胞骨架重塑的影响 | 第62-63页 |
4 讨论 | 第63-65页 |
5 参考文献 | 第65-69页 |
第三部分 Notch1在人肝癌裸鼠皮下移植瘤内VM形成中的作用 | 第69-88页 |
1 材料 | 第69-71页 |
1.1 细胞株和实验动物 | 第69页 |
1.1.1 细胞株 | 第69页 |
1.1.2 实验动物 | 第69页 |
1.2 实验试剂 | 第69-70页 |
1.3 主要实验仪器 | 第70-71页 |
1.4 主要试剂配制 | 第71页 |
1.4.1 细胞培养主要试剂配方 | 第71页 |
1.4.2 电子染色液配制 | 第71页 |
2 方法 | 第71-74页 |
2.1 细胞培养 | 第71页 |
2.2 GFP标记细胞 | 第71页 |
2.3 人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立 | 第71页 |
2.4 观察指标 | 第71页 |
2.5 石蜡切片的制作 | 第71-72页 |
2.6 苏木精-伊红染色(H&E染色) | 第72页 |
2.7 免疫组织化学染色 | 第72-73页 |
2.8 PAS-CD34双染色 | 第73页 |
2.9 活体动物荧光成像 | 第73页 |
2.10 透射电镜扫描(TEM) | 第73-74页 |
2.11 统计方法 | 第74页 |
3 结果 | 第74-81页 |
3.1 四种细胞的成瘤结果及皮下移植瘤的生长 | 第74-76页 |
3.2 四种皮下移植瘤的H&E染色观察 | 第76-77页 |
3.3 四种细胞皮下移植瘤的PAS-CD34双染 | 第77-78页 |
3.4 四种细胞皮下移植瘤中VM的透射电镜观察 | 第78-79页 |
3.5 移植瘤中上皮间质转化标记的表达 | 第79-81页 |
4 讨论 | 第81-83页 |
5 参考文献 | 第83-88页 |
第四部分 南蛇藤茎提取物调控Notch1抑制肝癌的VM | 第88-115页 |
1 材料 | 第88-91页 |
1.1 药品 | 第88页 |
1.2 细胞株和实验动物 | 第88-89页 |
1.2.1 细胞株 | 第88-89页 |
1.2.2 实验动物 | 第89页 |
1.3 实验试剂 | 第89-90页 |
1.4 主要实验仪器 | 第90-91页 |
1.5 主要试剂配制 | 第91页 |
2 方法 | 第91-94页 |
2.1 药物准备 | 第91-92页 |
2.1.1 南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(COE) | 第91-92页 |
2.1.2 DAPT | 第92页 |
2.2 细胞培养 | 第92页 |
2.3 CCK-8分析 | 第92页 |
2.4 活细胞工作站观察 | 第92页 |
2.5 Transwell小室侵袭实验 | 第92-93页 |
2.6 体外VM形成实验 | 第93页 |
2.7 细胞骨架染色 | 第93页 |
2.8 实时荧光PCR | 第93页 |
2.9 Western blot实验 | 第93-94页 |
2.10 人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立 | 第94页 |
2.11 实验分组及给药 | 第94页 |
2.12 观察指标 | 第94页 |
2.13 石蜡切片的制作 | 第94页 |
2.14 苏木精-伊红染色(H&E染色) | 第94页 |
2.15 免疫组织化学染色 | 第94页 |
2.16 PAS-CD34双染色 | 第94页 |
2.17 活体荧光成像 | 第94页 |
2.18 透射电镜扫描 | 第94页 |
2.19 统计方法 | 第94页 |
3 结果 | 第94-107页 |
3.1 COE抑制肝癌细胞的体外增殖 | 第95-96页 |
3.2 COE抑制肝癌细胞的体外侵袭 | 第96-98页 |
3.3 COE抑制肝癌细胞的体外VM | 第98-100页 |
3.4 COE抑制肝癌细胞Notch1、Hes1的表达 | 第100页 |
3.5 COE抑制肝癌细胞VM过程中的上皮间质转化 | 第100-103页 |
3.6 COE抑制MHCC97-H裸鼠皮下移植瘤的生长 | 第103-104页 |
3.7 COE抑制MHCC97-H裸鼠皮下移植瘤内VM | 第104-106页 |
3.8 COE下调移植瘤内Notch1、Hes1的表达 | 第106页 |
3.9 COE抑制移植瘤内EMT标记蛋白表达 | 第106-107页 |
4 讨论 | 第107-110页 |
5 参考文献 | 第110-115页 |
文献综述 | 第115-134页 |
参考文献 | 第123-134页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第134-135页 |
致谢 | 第135-136页 |