| 英文缩略词 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 技术路线 | 第17-18页 |
| 第一部分 MSCs的体外培养、鉴定及冻存 | 第18-40页 |
| 1. 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 1.3 主要试剂配置 | 第20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.1 MSCs的体外分离、培养及传代 | 第20-22页 |
| 2.1.1 常用设备的消毒 | 第20页 |
| 2.1.2 MSCs的体外分离 | 第20-21页 |
| 2.1.3 MSCs的原代培养 | 第21页 |
| 2.1.4 MSCs的传代培养 | 第21-22页 |
| 2.2 MSCs的鉴定 | 第22-24页 |
| 2.2.1 MSCs的形态学观察 | 第22页 |
| 2.2.2 CCK8法检测MSCs的生长情况 | 第22页 |
| 2.2.3 FCM检测MSCs相关表面分子标志物 | 第22-23页 |
| 2.2.4 MSCs多向分化潜能的检测 | 第23-24页 |
| 2.3 MSCs的冻存及冻存效果的检测 | 第24-25页 |
| 2.3.1 MSCs的冻存方法 | 第24页 |
| 2.3.2 冻存效果检测 | 第24-25页 |
| 2.3.2.1 MSCs的复苏 | 第24页 |
| 2.3.2.2 细胞存活率检测 | 第24页 |
| 2.3.2.3 CCK8法检测细胞的生长情况 | 第24-25页 |
| 2.3.2.4 FCM检测复苏细胞的MSCs相关表面分子标志物 | 第25页 |
| 2.4 统计学分析 | 第25-26页 |
| 3. 结果 | 第26-37页 |
| 3.1 MSCs的体外分离和培养 | 第26-27页 |
| 3.2 MSCs的鉴定 | 第27-34页 |
| 3.3 MSCs冻存效果的检测 | 第34-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-40页 |
| 第二部分 OY-TES-1在MSCs中的表达及RNAi方法的建立 | 第40-66页 |
| 1. 实验材料 | 第40-42页 |
| 1.1 细胞 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第41页 |
| 1.4 主要抗体 | 第41页 |
| 1.5 主要仪器 | 第41页 |
| 1.6 主要试剂配置 | 第41-42页 |
| 1.7 引物及siRNA序列 | 第42页 |
| 2. 实验方法 | 第42-53页 |
| 2.1 MSCs的复苏 | 第42-43页 |
| 2.2 MSCs中OY-TES-1的检测 | 第43-50页 |
| 2.2.1 mRNA检测 | 第43-47页 |
| 2.2.1.1 总RNA提取的准备 | 第43页 |
| 2.2.1.2 总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.1.3 RNA质量检测 | 第44-45页 |
| 2.2.1.4 cDNA合成 | 第45页 |
| 2.2.1.5 cDNA质量检测 | 第45-46页 |
| 2.2.1.6 OY-TES-1的扩增 | 第46-47页 |
| 2.2.2 蛋白质检测 | 第47-50页 |
| 2.2.2.1 免疫细胞化学染色 | 第47-48页 |
| 2.2.2.2 细胞免疫荧光染色 | 第48页 |
| 2.2.2.3 Western blot | 第48-50页 |
| 2.3 siRNA转染和OY-TES-1干扰效检测 | 第50-53页 |
| 2.3.1 转染效率的测定 | 第50-51页 |
| 2.3.2 最佳干扰时间点的确定 | 第51页 |
| 2.3.3 转染细胞的形态学观察及MSCs相关表面分子标志物的检测 | 第51-52页 |
| 2.3.4 mRNA水平检测干扰效率 | 第52页 |
| 2.3.5 蛋白质水平检测干扰效率 | 第52页 |
| 2.3.6 统计学分析 | 第52-53页 |
| 3. 结果 | 第53-62页 |
| 3.1 复苏MSCs的观察 | 第53页 |
| 3.2 MSCs表达OY-TES-1基因 | 第53-55页 |
| 3.2.1 mRNA水平的检测 | 第53-54页 |
| 3.2.2 蛋白质水平的检测 | 第54-55页 |
| 3.3 siRNA下调OY-TES-1表达 | 第55-62页 |
| 3.3.1 转染效率的检测 | 第55-56页 |
| 3.3.2 最佳干扰时间点的确定 | 第56-57页 |
| 3.3.3 细胞形态观察及表面分子标志物的表达 | 第57-60页 |
| 3.3.4 OY-TES-1mRNA水平的抑制 | 第60页 |
| 3.3.5 OY-TES-1蛋白质水平的抑制 | 第60-62页 |
| 4. 讨论 | 第62-66页 |
| 第三部分 下调OY-TES-1表达对MSCs生物学行为的影响 | 第66-83页 |
| 1. 实验材料 | 第66-67页 |
| 1.1 细胞 | 第66页 |
| 1.2 主要试剂 | 第66-67页 |
| 1.3 主要试剂盒 | 第67页 |
| 1.4 主要抗体 | 第67页 |
| 1.5 引物 | 第67页 |
| 1.6 主要试剂的配置 | 第67页 |
| 1.7 主要仪器 | 第67页 |
| 2. 实验方法 | 第67-72页 |
| 2.1 细胞的复苏及培养 | 第67页 |
| 2.2 下调OY-TES-1对MSCs生物学行为的影响 | 第67-72页 |
| 2.2.1 CCK8法检测MSCs的增殖能力 | 第67-68页 |
| 2.2.2 MSCs细胞周期及相关周期蛋白的检测 | 第68-69页 |
| 2.2.3 MSCs凋亡及相关凋亡蛋白的检测 | 第69-70页 |
| 2.2.4 MSCs迁移能力的检测 | 第70-71页 |
| 2.2.5 统计学分析 | 第71-72页 |
| 3. 结果 | 第72-80页 |
| 3.1 细胞增殖抑制 | 第72页 |
| 3.2 细胞周期和细胞周期相关蛋白表达的变化 | 第72-74页 |
| 3.3 细胞凋亡率和调控细胞凋亡相关蛋白表达的变化 | 第74-76页 |
| 3.4 细胞的迁移能力下降 | 第76-80页 |
| 4. 讨论 | 第80-83页 |
| 第四部分 问题与展望 | 第83-85页 |
| 全文小结 | 第85-86页 |
| 创新点 | 第86-87页 |
| 正文参考文献 | 第87-98页 |
| 附录 主要试剂的配制 | 第98-104页 |
| 综述 Research progress of CTA | 第104-120页 |
| Reference | 第113-120页 |
| 读博期间发表的论文、著书、承担课题及获奖情况 | 第120-121页 |
