| 摘要 | 第16-20页 |
| Abstract | 第20-24页 |
| 符号说明及缩写词 | 第25-27页 |
| 第一章 研究背景与立题依据 | 第27-41页 |
| 1.1 透明质酸 | 第27-32页 |
| 1.1.1 透明质酸的来源与结构 | 第27-28页 |
| 1.1.2 透明质酸的理化性质 | 第28-29页 |
| 1.1.3 透明质酸的生理功能 | 第29-30页 |
| 1.1.4 透明质酸的应用 | 第30-32页 |
| 1.1.5 寡聚透明质酸 | 第32页 |
| 1.2 透明质酸酶 | 第32-40页 |
| 1.2.1 透明质酸酶的发现 | 第32-33页 |
| 1.2.2 透明质酸酶分类 | 第33-34页 |
| 1.2.3 真核生物透明质酸酶 | 第34-35页 |
| 1.2.4 原核生物透明质酸酶 | 第35-37页 |
| 1.2.5 透明质酸酶活性测定方法 | 第37-40页 |
| 1.3 立题依据及研究内容 | 第40-41页 |
| 第二章 透明质酸酶产生菌株的筛选与鉴定 | 第41-49页 |
| 2.1 引言 | 第41页 |
| 2.2 试验材料、试剂与仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.1 实验样品来源 | 第41页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.3 试剂 | 第42页 |
| 2.2.4 培养基 | 第42页 |
| 2.3 试验方法 | 第42-44页 |
| 2.3.1 初筛 | 第42-43页 |
| 2.3.2 复筛 | 第43页 |
| 2.3.3 菌株传代稳定性实验 | 第43页 |
| 2.3.4 相对酶活测定 | 第43页 |
| 2.3.5 菌株A50的鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与分析 | 第44-48页 |
| 2.4.1 菌株的筛选结果 | 第44-46页 |
| 2.4.2 菌株传代稳定性实验结果 | 第46页 |
| 2.4.3 菌株A50的鉴定 | 第46-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-49页 |
| 第三章 芽孢杆菌Bacillus sp.A50发酵工艺优化 | 第49-62页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 试验材料、试剂与仪器 | 第49-50页 |
| 3.2.1 菌株 | 第49页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第49页 |
| 3.2.3 试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.4 培养基 | 第50页 |
| 3.3 试验方法 | 第50-54页 |
| 3.3.1 相对酶活测定 | 第50页 |
| 3.3.2 浊度法测定酶活(中国药典法) | 第50-52页 |
| 3.3.3 摇瓶中优化发酵培养基 | 第52-53页 |
| 3.3.4 10L发酵罐中透明质酸酶发酵工艺的研究 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.4.1 碳源对透明质酸酶发酵的影响 | 第54页 |
| 3.4.2 葡萄糖浓度对透明质酸酶发酵的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.3 氮源对透明质酸酶发酵的影响 | 第55页 |
| 3.4.4 复合氮源对透明质酸酶发酵的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.5 磷酸盐对透明质酸酶发酵的影响 | 第56页 |
| 3.4.6 KH_2PO_4浓度对透明质酸酶发酵的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.7 Mg_(2+)浓度对透明质酸酶发酵的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.8 pH对透明质酸酶发酵的影响 | 第58页 |
| 3.4.9 发酵温度对透明质酸酶发酵的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.10 转速对透明质酸酶发酵的影响 | 第59页 |
| 3.4.11 通气量对透明质酸酶发酵的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.12 发酵时间对透明质酸酶发酵的影响 | 第60页 |
| 3.4.13 优化发酵工艺后透明质酸酶发酵液的酶活 | 第60-61页 |
| 3.5 讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 芽孢杆菌Bacillus sp.A50透明质酸酶的分离纯化 | 第62-68页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 试验材料、试剂与仪器 | 第62-63页 |
| 4.2.1 发酵液 | 第62页 |
| 4.2.2 主要试剂及耗材 | 第62-63页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第63页 |
| 4.3 试验方法 | 第63-65页 |
| 4.3.1 粗提液的制备 | 第63页 |
| 4.3.2 阴离子交换层析 | 第63页 |
| 4.3.3 凝胶过滤层析 | 第63-64页 |
| 4.3.4 浊度法测定酶活(中国药典法) | 第64页 |
| 4.3.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 | 第64页 |
| 4.3.6 SDS-PAGE | 第64-65页 |
| 4.4 结果与分析 | 第65-67页 |
| 4.4.1 离子交换层析 | 第65-66页 |
| 4.4.2 凝胶过滤层析 | 第66-67页 |
| 4.4.3 HAase-B纯度和得率分析 | 第67页 |
| 4.5 讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 透明质酸酶HAase-B的酶学性质研究 | 第68-80页 |
| 5.1 引言 | 第68-69页 |
| 5.2 试验材料、试剂与仪器 | 第69-70页 |
| 5.2.1 透明质酸酶 | 第69页 |
| 5.2.2 主要试剂及耗材 | 第69-70页 |
| 5.2.3 主要仪器设备 | 第70页 |
| 5.3 试验方法 | 第70-73页 |
| 5.3.1 相对酶活测定 | 第70页 |
| 5.3.2 最适反应温度测定 | 第70-71页 |
| 5.3.3 热稳定性测定 | 第71页 |
| 5.3.4 最适反应pH测定 | 第71页 |
| 5.3.5 pH稳定性测定 | 第71页 |
| 5.3.6 底物溶液中Na_2HPO_4-NaH_2PO_4缓冲液浓度对酶活影响 | 第71-72页 |
| 5.3.7 底物溶液中NaCl浓度对酶活影响 | 第72页 |
| 5.3.8 金属离子、金属离子螫合剂及表面活性剂对酶活影响 | 第72页 |
| 5.3.9 底物特异性实验 | 第72页 |
| 5.3.10 HAase-B降解HA及CSA酶动力学参数测定 | 第72-73页 |
| 5.4 结果与分析 | 第73-79页 |
| 5.4.1 最适反应温度及热稳定性 | 第73-74页 |
| 5.4.2 最适反应pH及不同pH下的稳定性 | 第74页 |
| 5.4.3 NaCl及Na_2HPO_4-NaH_2PO_4缓冲液浓度对酶活的影响 | 第74-75页 |
| 5.4.4 金属离子、金属离子螯合剂及表面活性剂对酶活影响 | 第75-76页 |
| 5.4.5 HAase-B的底物特异性研究 | 第76-77页 |
| 5.4.6 HAase-B降解HA及CSA酶动力学研究 | 第77-79页 |
| 5.5 讨论 | 第79-80页 |
| 第六章 芽孢杆菌Bacillus sp.A50分泌的透明质酸酶HAase-B基因测序及序列分析 | 第80-93页 |
| 6.1 引言 | 第80页 |
| 6.2 试验材料、试剂与仪器 | 第80-81页 |
| 6.2.1 主要试剂与仪器 | 第80-81页 |
| 6.2.2 数据库及分析软件 | 第81页 |
| 6.3 试验方法 | 第81-82页 |
| 6.3.1 芽孢杆菌Bacillus sp.A50全基因组初步测序 | 第81页 |
| 6.3.2 HAase-B的N端测序 | 第81页 |
| 6.3.3 HAase-B的肽谱分析(ESI-Q-TOF2) | 第81页 |
| 6.3.4 HAase-B肽段序列与Bacillus sp.A50基因组DNA序列信息比对 | 第81-82页 |
| 6.4 结果与分析 | 第82-91页 |
| 6.4.1 芽孢杆菌Bacillus sp.A50全基因组初步测序结果 | 第82页 |
| 6.4.2 HAase-B的N端序列和内肽序列测定结果 | 第82页 |
| 6.4.3 编码HAase-B基因(hyl)序列的获得 | 第82-89页 |
| 6.4.4 hyl基因的序列分析 | 第89-91页 |
| 6.5 讨论 | 第91-93页 |
| 第七章 寡聚透明质酸的酶切法制备及生物活性研究 | 第93-108页 |
| 7.1 引言 | 第93页 |
| 7.2 试验材料、试剂与仪器 | 第93-94页 |
| 7.2.1 主要试剂耗材 | 第93页 |
| 7.2.2 细胞株及培养基 | 第93-94页 |
| 7.2.3 主要仪器 | 第94页 |
| 7.3 试验方法 | 第94-99页 |
| 7.3.1 Oligo-HA的制备与纯化 | 第94-95页 |
| 7.3.2 Oligo-HA的质量分析 | 第95-96页 |
| 7.3.3 Oligo-HA的生物活性 | 第96-99页 |
| 7.3.4 统计学分析方法 | 第99页 |
| 7.4 结果与分析 | 第99-107页 |
| 7.4.1 Oligo-HA的红外光谱 | 第99-100页 |
| 7.4.2 Oligo-HA的含量 | 第100-101页 |
| 7.4.3 Oligo-HA的细胞毒性 | 第101-103页 |
| 7.4.4 Oligo-HA的生物活性 | 第103-107页 |
| 7.5 讨论 | 第107-108页 |
| 全文总结与展望 | 第108-111页 |
| 1 总结 | 第108-109页 |
| 2 展望 | 第109-111页 |
| 在读博士期间发表的论文及专利 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-122页 |
| 英文论文 | 第122-130页 |
| 附件 | 第130-186页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第186页 |
