| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 病原分子生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 流行病学及病理变化 | 第11-12页 |
| 1.1.3 检测技术研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 猪圆环病毒感染研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 病原分子生物学特性 | 第14页 |
| 1.2.2 流行病学及病理变化 | 第14-15页 |
| 1.2.3 检测技术研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 猪链球菌病研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 病原分子生物学特性 | 第17页 |
| 1.3.2 流行病学及病理变化 | 第17页 |
| 1.3.3 检测技术研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 多重 PCR 方法的建立及初步应用 | 第20-30页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 参考毒株 | 第20页 |
| 2.1.2 病料采集 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂及配制 | 第20-22页 |
| 2.1.4 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 细菌培养 | 第23页 |
| 2.2.2 细胞复苏与培养 | 第23页 |
| 2.2.3 病毒的增殖 | 第23页 |
| 2.2.4 病原体RNA、DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 单重PCR检测方法的建立 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化与回收 | 第24-25页 |
| 2.2.7 目的基因与pMD19-T载体连接 | 第25页 |
| 2.2.8 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备-CaCl_2法 | 第25-26页 |
| 2.2.9 连接产物的转化 | 第26页 |
| 2.2.10 重组质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.11 重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.12 序列测定 | 第27页 |
| 2.2.13 单重PCR反应条件的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.14 多重PCR检测方法的建立 | 第28页 |
| 2.2.15 多重PCR反应条件的优化 | 第28页 |
| 2.2.16 多重PCR特异性试验 | 第28-29页 |
| 2.2.17 单重PCR和多重PCR敏感性试验 | 第29页 |
| 2.2.18 重复性试验 | 第29页 |
| 2.2.19 单重PCR与多重PCR阳性符合率检测 | 第29页 |
| 2.2.20 临床样品检测 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-43页 |
| 3.1 单重 PCR 方法建立的结果 | 第30-31页 |
| 3.2 重组质粒酶切鉴定结果 | 第31页 |
| 3.3 序列测定及分析 | 第31-32页 |
| 3.4 单重 PCR 反应条件的优化结果 | 第32-35页 |
| 3.4.1 单重PCR方法退火温度优化结果 | 第32页 |
| 3.4.2 单重PCR反应dNTP优化结果 | 第32-33页 |
| 3.4.3 单重PCR反应引物优化结果 | 第33-34页 |
| 3.4.4 单重 PCR 反应 Mg_2+优化结果 | 第34-35页 |
| 3.4.5 单重PCR反应循环数优化结果 | 第35页 |
| 3.5 多重 PCR 方法的建立结果 | 第35-36页 |
| 3.6 多重 PCR 反应条件的优化结果 | 第36-38页 |
| 3.6.1 多重PCR反应退火温度优化结果 | 第36页 |
| 3.6.2 多重 PCR 反应 Mg2_+优化结果 | 第36-37页 |
| 3.6.3 多重PCR反应dNTP优化结果 | 第37页 |
| 3.6.4 多重PCR反应引物优化结果 | 第37-38页 |
| 3.6.5 多重PCR反应循环数优化结果 | 第38页 |
| 3.7 多重 PCR 反应特异性试验结果 | 第38页 |
| 3.8 单重 PCR 和多重 PCR 反应敏感性试验结果 | 第38-40页 |
| 3.9 重复性试验结果 | 第40页 |
| 3.10 单重 PCR 与多重 PCR 阳性符合率检测结果 | 第40页 |
| 3.11 临床样品检测结果 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 单重 PCR 检测方法的建立 | 第43页 |
| 4.2 多重 PCR 检测方法的建立 | 第43-44页 |
| 4.3 应用多重 PCR 方法对临床样品的检测 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
