药用植物红豆杉和蛇足石杉内生真菌多样性及其生物活性产物的研究
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 植物内生真菌简介 | 第11-12页 |
| 1.1.1 内生菌的定义 | 第11页 |
| 1.1.2 内生真菌的研究历史 | 第11页 |
| 1.1.3 内生真菌的多样性 | 第11-12页 |
| 1.1.4 内生真菌的开发和应用 | 第12页 |
| 1.2 植物内生真菌的研究方法 | 第12-16页 |
| 1.2.1 内生真菌的分离 | 第12-14页 |
| 1.2.2 内生真菌的鉴定 | 第14-15页 |
| 1.2.3 内生真菌天然产物的筛选 | 第15-16页 |
| 1.3 与本研究相关的植物简介 | 第16-17页 |
| 1.3.1 红豆杉 | 第16-17页 |
| 1.3.2 蛇足石杉 | 第17页 |
| 1.4 本研究的目的、意义和主要内容 | 第17-20页 |
| 1.4.1 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 主要内容 | 第18-20页 |
| 第2章 可培养内生真菌的分离纯化与鉴定 | 第20-40页 |
| 2.1 引言 | 第20-21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第21页 |
| 2.2.2 试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.3 分离培养基 | 第22页 |
| 2.2.4 液体培养基 | 第22页 |
| 2.2.5 主要器材与设备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 植物样品的采集 | 第23-24页 |
| 2.3.2 植物表面消毒 | 第24页 |
| 2.3.3 表面消毒效果的检验 | 第24页 |
| 2.3.4 内生真菌的分离与纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.5 形态排重 | 第25页 |
| 2.3.6 菌种保藏 | 第25页 |
| 2.3.7 菌丝体的培养 | 第25页 |
| 2.3.8 基因组的提取 | 第25页 |
| 2.3.9 ITS序列扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.10 序列比对 | 第26页 |
| 2.3.11 系统进化树的构建 | 第26页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第26-38页 |
| 2.4.1 表面消毒 | 第26页 |
| 2.4.2 内生真菌的分离与纯化 | 第26-28页 |
| 2.4.3 形态排重 | 第28-29页 |
| 2.4.4 基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.4.5 ITS序列扩增 | 第30页 |
| 2.4.6 ITS序列比对 | 第30-31页 |
| 2.4.7 红豆杉内生真菌多样性分析 | 第31-32页 |
| 2.4.8 红豆杉内生真菌系统进化树的构建 | 第32-35页 |
| 2.4.9 蛇足石杉内生真菌多样性分析 | 第35-36页 |
| 2.4.10 蛇足石杉内生真菌系统进化树 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 内生真菌的原位分析 | 第40-50页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 主要试剂及其配制 | 第40-41页 |
| 3.2.2 主要设备和仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 植物表面消毒 | 第41页 |
| 3.3.2 总DNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.3.3 ITS序列扩增 | 第42页 |
| 3.3.4 T载体连接 | 第42页 |
| 3.3.5 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第42-43页 |
| 3.3.6 阳性克隆验证与测序 | 第43页 |
| 3.3.7 序列比对 | 第43页 |
| 3.3.8 多样性分析 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-49页 |
| 3.4.1 ITS序列扩增 | 第43-44页 |
| 3.4.2 阳性克隆验证 | 第44-45页 |
| 3.4.3 红豆杉内生真菌多样性分析 | 第45-46页 |
| 3.4.4 系统进化分析 | 第46-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第4章 产生物活性产物菌株的筛选 | 第50-65页 |
| 4.1 引言 | 第50-51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 主要试剂及其配制 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要设备 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.3.1 分子探测初筛产紫杉醇菌株 | 第52-53页 |
| 4.3.2 PCR产物测序和比对 | 第53页 |
| 4.3.3 序列测序与分析 | 第53页 |
| 4.3.4 菌株发酵 | 第53页 |
| 4.3.5 紫杉醇的提取 | 第53页 |
| 4.3.6 HPLC-MS检测紫杉醇 | 第53页 |
| 4.3.7 化学筛选产生物碱菌株 | 第53页 |
| 4.3.8 B14化合物的分离 | 第53-54页 |
| 4.3.9 B14化合物的鉴定 | 第54页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第54-63页 |
| 4.4.1 分子探测初筛产紫杉醇菌株 | 第54-56页 |
| 4.4.2 PCR产物序列比对 | 第56-57页 |
| 4.4.3 HPLC-MS检测紫杉醇 | 第57-60页 |
| 4.4.4 化学筛选产生物碱菌株 | 第60-61页 |
| 4.4.5 B14化合物的鉴定 | 第61-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第5章 结论和展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录1 | 第73-78页 |
| 附录2 | 第78-80页 |
| 附录3 | 第80-83页 |
| 论文发表情况 | 第83页 |
