| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写对照表 | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 PRRSV病原学 | 第11-15页 |
| 1.1.1 PRRSV的分类地位及基因组结构 | 第11页 |
| 1.1.2 PRRSV的形态结构及理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 PRRSV的结构和非结构蛋白 | 第12-14页 |
| 1.1.4 PRRSV的非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.1.5 PRRSV的基因分型 | 第15页 |
| 1.2 PRRSV的流行病学特征 | 第15-17页 |
| 1.2.1 PRRSV的宿主及临床症状 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PRRSV的病理变化 | 第16页 |
| 1.2.3 PRRSV的传播途径 | 第16页 |
| 1.2.4 PRRSV的疫苗与防控措施 | 第16-17页 |
| 1.3 PRRSV的遗传变异 | 第17-18页 |
| 1.3.1 RNA病毒的复制特性 | 第17页 |
| 1.3.2 准种现象 | 第17-18页 |
| 1.3.3 基因重组 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 病毒、菌株、载体及细胞 | 第20页 |
| 2.2 细胞培养相关试剂 | 第20页 |
| 2.3 工具酶、试剂盒及主要的分子生物学试剂 | 第20-21页 |
| 2.4 检测样品 | 第21页 |
| 2.5 仪器设备 | 第21页 |
| 2.6 PRRSV血清抗体的检测 | 第21-22页 |
| 2.7 引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.8 样品的RT-PCR检测 | 第23-27页 |
| 2.8.1 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.8.2 cDNA的合成 | 第24页 |
| 2.8.3 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.8.4 PCR回收产物与载体连接 | 第25页 |
| 2.8.5 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.8.6 连接产物转化感受态细胞 | 第25页 |
| 2.8.7 PCR鉴定阳性菌液 | 第25页 |
| 2.8.8 ORF5及部分Nsp2基因测序结果分析 | 第25-27页 |
| 2.9 病毒的分离与鉴定 | 第27-29页 |
| 2.9.1 病毒的分离 | 第27页 |
| 2.9.2 分离病毒的PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.9.3 分离病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第27-28页 |
| 2.9.4 分离病毒的全基因组测序 | 第28页 |
| 2.9.5 分离病毒的全基因组序列分析 | 第28-29页 |
| 2.10 PRRSV Nsp1α及Nsp1β的原核表达 | 第29-34页 |
| 2.10.1 Nsp1α及Nsp1β的扩增 | 第29页 |
| 2.10.2 PCR扩增产物的纯化 | 第29页 |
| 2.10.3 目的片段与载体的双酶切 | 第29-30页 |
| 2.10.4 目的片段与载体的连接 | 第30页 |
| 2.10.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.10.6 重组质粒的转化 | 第30页 |
| 2.10.7 重组质粒的抽提 | 第30-31页 |
| 2.10.8 重组质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| 2.10.9 重组质粒序列的测定 | 第31页 |
| 2.10.10 重组质粒转化感受态细胞 | 第31页 |
| 2.10.11 重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第31页 |
| 2.10.12 重组蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第31-32页 |
| 2.10.13 重组蛋白最佳诱导时间的确定 | 第32页 |
| 2.10.14 重组蛋白最佳IPTG诱导浓度的确定 | 第32页 |
| 2.10.15 重组蛋白Western-Blot鉴定 | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-53页 |
| 3.1 2014-2015年华南部分地区PRRSV抗体检测结果 | 第34页 |
| 3.2 2014-2015年华南部分地区PRRSV抗原检测结果 | 第34-35页 |
| 3.3 2014-2015年部分Nsp2基因氨基酸比对分析 | 第35-36页 |
| 3.4 2014-2015年GP5基因遗传进化分析 | 第36-38页 |
| 3.5 2014-2015年GP5基因氨基酸同源性分析 | 第38页 |
| 3.6 2014-2015年GP5基因氨基酸突变位点分析 | 第38-41页 |
| 3.7 欧洲型PRRSV GP5遗传进化及突变分析 | 第41-42页 |
| 3.8 病毒的分离鉴定 | 第42页 |
| 3.9 PRRSV全基因组的扩增 | 第42-43页 |
| 3.10 PRRSV全基因组的遗传进化分析 | 第43-45页 |
| 3.11 分离毒株全基因组的同源性分析 | 第45-47页 |
| 3.12 分离毒株Nsp2及GP3/GP5/GP6基因氨基酸突变位点分析 | 第47-48页 |
| 3.13 分离毒株Nsp9/Nsp10基因氨基酸突变位点分析 | 第48页 |
| 3.14 Nsp1α及Nsp1β的扩增 | 第48-49页 |
| 3.15 重组质粒的酶切鉴定 | 第49页 |
| 3.16 重组质粒的表达与可溶性分析 | 第49-50页 |
| 3.17 重组蛋白的最佳诱导时间的确定 | 第50-51页 |
| 3.18 重组蛋白的最佳IPTG诱导浓度的确定 | 第51-52页 |
| 3.19 重组蛋白Western-blot鉴定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 2014-2015年华南部分地区PRRSV抗体和抗原的检测 | 第53页 |
| 4.2 Nsp2和GP5基因遗传进化与变异分析 | 第53-54页 |
| 4.3 PRRSV的分离鉴定及全基因组序列分析 | 第54-55页 |
| 4.4 PRRSV Nsp1α和Nsp1β的原核表达 | 第55-56页 |
| 5 全文总结 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
