| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 模式生物果蝇 | 第9页 |
| 1.2 果蝇生殖系统 | 第9-13页 |
| 1.2.1 卵子的发生 | 第9-10页 |
| 1.2.2. 研究方法 | 第10页 |
| 1.2.3 减数分裂简介 | 第10-11页 |
| 1.2.4 联会复合体 | 第11页 |
| 1.2.5 C(2)M | 第11-13页 |
| 1.2.6 研究问题 | 第13页 |
| 1.3 蛋白质相互作用的研究方法 | 第13-17页 |
| 1.3.1 串联亲和纯化 | 第13-14页 |
| 1.3.2 蛋白质芯片 | 第14-15页 |
| 1.3.3 荧光共振能量转移技术 | 第15页 |
| 1.3.4 酵母双杂交技术 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-24页 |
| 2.1.1 主要试剂和购买公司 | 第17-18页 |
| 2.1.2 载体 | 第18页 |
| 2.1.3 引物 | 第18-19页 |
| 2.1.4 菌株 | 第19页 |
| 2.1.5 培养基配制 | 第19-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 扩增c(2)M的CDS片段及片段和载体pGBKT-7的酶切、回收、连接 | 第24-25页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5α感受态的制备及连接产物转化、鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.3 小提大肠杆菌质粒 | 第26页 |
| 2.2.4 诱饵载体pGBKT7-c(2)M转化AH109酵母菌株 | 第26-27页 |
| 2.2.5 制备酵母蛋白样品 | 第27-28页 |
| 2.2.6 检测C(2)M是否能自激活报告基因 | 第28页 |
| 2.2.7 果蝇的cDNA文库转化含有pGBKT7-c(2)M的AH109菌株 | 第28-29页 |
| 2.2.8 阳性克隆的保种 | 第29页 |
| 2.2.9 提取酵母质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.10 将酵母质粒转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 2.2.11 PCR鉴定阳性克隆里的质粒是否为文库质粒 | 第30页 |
| 2.2.12 阳性质粒的自激活和回复验证 | 第30-32页 |
| 2.2.13 显微注射质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.14 转基因果蝇的构建 | 第33页 |
| 2.2.15 免疫荧光观察 | 第33-34页 |
| 2.2.16 S2细胞的复苏 | 第34-35页 |
| 2.2.17 S2细胞的传代 | 第35页 |
| 2.2.18 S2细胞的转染 | 第35页 |
| 2.2.19 免疫共沉淀 | 第35-37页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第37-52页 |
| 3.1 pGBKT7-c(2)M的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.1 扩增c(2)M的CDS片段 | 第37页 |
| 3.1.2 片段和载体pGBKT-7的酶切 | 第37-38页 |
| 3.1.3 pGBKT7-c(2)M的鉴定 | 第38页 |
| 3.1.4 分析 | 第38-39页 |
| 3.2 western blot检测pGBKT-7-c(2)M融合蛋白的表达 | 第39-41页 |
| 3.2.1 诱饵载体pGBKT7-c(2)M转化AH109酵母菌株 | 第39-40页 |
| 3.2.2 c(2)M在AH109菌株中的表达 | 第40页 |
| 3.2.3 分析 | 第40-41页 |
| 3.3 筛选果蝇cDNA文库 | 第41-43页 |
| 3.3.1 诱饵蛋白c(2)M自激活检测 | 第41-42页 |
| 3.3.2 文库筛选结果 | 第42页 |
| 3.3.3 分析 | 第42-43页 |
| 3.4 文库质粒的提取及自激活和回复验证 | 第43-45页 |
| 3.4.1 PCR鉴定文库质粒 | 第43页 |
| 3.4.2 阳性质粒自激活和回复验证 | 第43-44页 |
| 3.4.3 分析 | 第44-45页 |
| 3.5 阳性质粒测序和生物信息学分析 | 第45-48页 |
| 3.5.1 筛选结果的统计 | 第45-47页 |
| 3.5.2 部分基因的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| 3.6 wech和Psf1的基因沉默型果蝇的构建以及表型的初步分析 | 第48-51页 |
| 3.6.1 knockdown质粒的构建 | 第48-49页 |
| 3.6.2 wech和Psf1表型的免疫荧光观察 | 第49页 |
| 3.6.3 分析 | 第49-51页 |
| 3.7 C(2)M与wech和Psf1相互作用的分析 | 第51-52页 |
| 3.7.1 免疫共沉淀检测c(2)M与wech和Psf1的相互作用 | 第51页 |
| 3.7.2 分析 | 第51-52页 |
| 第四章 结论与展望 | 第52-54页 |
| 8.1 结果 | 第52页 |
| 8.2 讨论 | 第52-53页 |
| 8.3 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
