| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-14页 |
| 1.1 漆酶与玉米大斑病的关系 | 第11页 |
| 1.2 真菌漆酶简介 | 第11-12页 |
| 1.3 漆酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.4 本论文的研究内容和意义 | 第13-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 培养基 | 第14页 |
| 2.1.3 主要试剂及其配制 | 第14-16页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2.2 大斑刚毛座腔菌漆酶同工酶基因的表达量分析 | 第17-19页 |
| 2.2.1 漆酶基因的克隆 | 第17-18页 |
| 2.2.2 漆酶基因在病菌侵染过程中不同时期的表达量分析 | 第18页 |
| 2.2.3 不同漆酶基因在不同诱导剂下的表达量分析 | 第18-19页 |
| 2.3 大斑刚毛座腔菌StLAC1 和StLAC2 基因回复突变体的创制 | 第19-21页 |
| 2.3.1 StLAC1 和StLAC2 基因重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.3.2 大斑刚毛座腔菌St LAC1（St LAC2）基因回复突变体的获得 | 第21页 |
| 2.3.3 转化子的Southern blotting验证 | 第21页 |
| 2.4 StLAC1 基因回复突变体分析 | 第21-24页 |
| 2.4.1 突变菌株生长发育分析 | 第21-22页 |
| 2.4.2 漆酶活性测定 | 第22页 |
| 2.4.3 胞内黑色素分析 | 第22页 |
| 2.4.4 StLAC1 基因缺失与菌株附着胞膨压的关系测定 | 第22-23页 |
| 2.4.5 渗透调节能力分析 | 第23-24页 |
| 2.5 St LAC2 基因的回复突变体分析 | 第24-25页 |
| 2.5.1 突变体生理生化分析 | 第24页 |
| 2.5.2 突变体疏水性测定 | 第24页 |
| 2.5.3 突变体细胞壁完整性测定和细胞壁观察 | 第24页 |
| 2.5.4 突变菌株的组织病理学分析 | 第24-25页 |
| 2.6 StLAC1、StLAC2 双基因敲除转化子的创制 | 第25-26页 |
| 2.6.1 StLAC1、StLAC2 双基因敲除载体的构建 | 第25页 |
| 2.6.2 StLAC2 基因同源片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.6.3 目的片段与目标载体的连接 | 第26页 |
| 2.6.4 StLAC1、StLAC2 双基因敲除转化子的获得 | 第26页 |
| 2.7 大斑刚毛座腔菌漆酶的发酵和酶学性质的验证 | 第26-29页 |
| 2.7.1 发酵基本条件 | 第26-27页 |
| 2.7.2 单因素试验优化 | 第27页 |
| 2.7.3 响应面优化试验设计 | 第27页 |
| 2.7.4 漆酶活力测定 | 第27页 |
| 2.7.5 漆酶酶学性质分析 | 第27-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-57页 |
| 3.1 大斑刚毛座腔菌漆酶家族基因的表达规律 | 第29-34页 |
| 3.1.1 漆酶基因的克隆 | 第29页 |
| 3.1.2 不同漆酶基因在生长发育及侵染时期的表达量 | 第29-32页 |
| 3.1.3 不同漆酶基因在外源刺激物作用下的表达量 | 第32-34页 |
| 3.2 StLAC1和 StLAC2 基因的回复突变体 | 第34-35页 |
| 3.2.1 基因回复突变载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3 回复突变体 StLAC1 基因的分析 | 第35-40页 |
| 3.3.1 病菌生长发育 | 第35-36页 |
| 3.3.2 黑色素合成 | 第36页 |
| 3.3.3 附着胞形成和穿透能力 | 第36-37页 |
| 3.3.4 病菌细胞壁的孔径 | 第37-38页 |
| 3.3.5 附着胞膨压 | 第38-39页 |
| 3.3.6 致病性 | 第39页 |
| 3.3.7 其它漆酶基因在St LAC1 基因缺失突变体的转录水平 | 第39-40页 |
| 3.4 回复突变体 StLAC2 基因的功能分析 | 第40-47页 |
| 3.4.1 病菌生长发育分析 | 第40-42页 |
| 3.4.2 StLAC2 基因回复突变体的产孢能力 | 第42-43页 |
| 3.4.3 漆酶活性 | 第43页 |
| 3.4.4 黑色素合成 | 第43-44页 |
| 3.4.5 病菌的细胞壁完整性 | 第44-45页 |
| 3.4.6 病菌菌丝细胞壁的疏水性 | 第45页 |
| 3.4.7 玻璃纸穿透能力 | 第45-46页 |
| 3.4.8 StLAC2 基因回复突变体的组织病理学观察 | 第46-47页 |
| 3.4.9 StLAC2 基因回复突变体的抗渗透胁迫能力分析 | 第47页 |
| 3.5 StLAC1、StLAC2 双基因敲除转化子的创制及分析 | 第47-48页 |
| 3.6 大斑刚毛座腔菌漆酶的发酵和酶学性质的验证 | 第48-57页 |
| 3.6.1 发酵产酶曲线 | 第48页 |
| 3.6.2 漆酶分泌条件的单因素试验 | 第48-50页 |
| 3.6.3 响应面分析试验 | 第50-54页 |
| 3.6.4 漆酶酶学性质研究 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 真菌中漆酶基因与其生长、发育、侵染和致病性的关系 | 第57-58页 |
| 4.2 漆酶的发酵工艺与漆酶的工业化前景 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
