| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 我国猪伪狂犬病毒变异株研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 伪狂犬病 | 第15-17页 |
| 1.1.2 伪狂犬病的再次爆发与流行 | 第17-18页 |
| 1.1.3 PRV变异株的分离与鉴定 | 第18页 |
| 1.1.4 PRV变异株疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 1.1.5 PR的诊断与防控 | 第19页 |
| 1.2 疱疹病毒感染性细菌人工染色体克隆 | 第19-21页 |
| 1.2.1 BAC载体 | 第19-20页 |
| 1.2.2 BAC在疱疹病毒上的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.3 疱疹病毒感染性BAC克隆修饰技术 | 第21页 |
| 1.3 基于galk正反筛选的BAC修饰技术 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 含有BAC载体重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1.1 病毒和细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 主要酶和试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.1.6 转移载体构建 | 第25-26页 |
| 2.1.7 重组病毒构建技术路线 | 第26-28页 |
| 2.1.8 重组病毒一步生长曲线 | 第28-29页 |
| 2.1.9 重组病毒空斑实验 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-32页 |
| 2.2.1 转移载体构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.2 重组病毒筛选及纯化 | 第30页 |
| 2.2.3 重组病毒一步生长曲线 | 第30-31页 |
| 2.2.4 重组病毒空斑大小和形态 | 第31-32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 PRV JS-2012 全基因组感染性细菌人工染色体克隆的获得及病毒拯救 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-36页 |
| 3.1.1 病毒、细胞和菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第33-34页 |
| 3.1.5 重组病毒rJS2012-BAC环状基因组提取 | 第34页 |
| 3.1.6 DH10B电转感受态制备 | 第34页 |
| 3.1.7 环状基因组电转化 | 第34-35页 |
| 3.1.8 阳性克隆筛选及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.9 病毒拯救 | 第36页 |
| 3.1.10 删除BAC载体的病毒拯救 | 第36页 |
| 3.2 结果 | 第36-41页 |
| 3.2.1 菌液PCR鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2.2 RFLP分析 | 第38-40页 |
| 3.2.3 病毒拯救 | 第40页 |
| 3.2.4 删除BAC载体的病毒拯救 | 第40-41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-43页 |
| 3.3.1 环状基因组的提取 | 第41页 |
| 3.3.2 电转条件的优化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第42-43页 |
| 第四章 拯救病毒生物学特性研究 | 第43-47页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第43页 |
| 4.1.2 试剂、耗材和仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 实验动物 | 第43页 |
| 4.1.4 拯救病毒滴度测定 | 第43页 |
| 4.1.5 拯救病毒一步生长曲线 | 第43-44页 |
| 4.1.6 拯救病毒空斑实验 | 第44页 |
| 4.1.7 拯救病毒小鼠致病性实验 | 第44页 |
| 4.2 结果 | 第44-46页 |
| 4.2.1 拯救病毒一步生长曲线 | 第44页 |
| 4.2.2 拯救病毒空斑形态 | 第44-45页 |
| 4.2.3 小鼠致病性实验 | 第45-46页 |
| 4.3 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 利用pJS-2012BAC及galk正反筛选系统构建gE/gI缺失病毒 | 第47-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第47-52页 |
| 5.1.1 病毒、细胞和抗体 | 第47页 |
| 5.1.2 质粒和菌株 | 第47页 |
| 5.1.3 培养基的配制 | 第47-48页 |
| 5.1.4 常用试剂及溶液配制 | 第48页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第48页 |
| 5.1.6 引物设计 | 第48-49页 |
| 5.1.7 正反筛选技术路线 | 第49页 |
| 5.1.8 转移载体pSKEI构建 | 第49-50页 |
| 5.1.9 galk表达盒的获得 | 第50页 |
| 5.1.10 pJS-2012BAC电转化入SW102 | 第50页 |
| 5.1.11 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第50页 |
| 5.1.12 正筛选电转感受态的制备 | 第50-51页 |
| 5.1.13 正筛选电转化 | 第51页 |
| 5.1.14 正筛选鉴定 | 第51页 |
| 5.1.15 负筛选目的基因、感受态的制备 | 第51页 |
| 5.1.16 负筛选电转化 | 第51页 |
| 5.1.17 负筛选鉴定 | 第51页 |
| 5.1.18 病毒拯救 | 第51-52页 |
| 5.1.19 拯救病毒IFA鉴定 | 第52页 |
| 5.1.20 拯救病毒一步生长曲线 | 第52页 |
| 5.1.21 拯救病毒空斑实验 | 第52页 |
| 5.2 结果 | 第52-58页 |
| 5.2.1 转移载体pSKEI构建 | 第52-53页 |
| 5.2.2 galk表达盒的获得 | 第53-54页 |
| 5.2.3 pJS-2012BAC电转化入SW102筛选鉴定 | 第54-55页 |
| 5.2.4 正筛选结果鉴定 | 第55页 |
| 5.2.5 负筛选结果鉴定 | 第55-56页 |
| 5.2.6 病毒拯救 | 第56-57页 |
| 5.2.7 IFA | 第57页 |
| 5.2.8 拯救病毒一步生长曲线 | 第57-58页 |
| 5.2.9 拯救病毒空斑形态 | 第58页 |
| 5.3 讨论 | 第58-60页 |
| 5.3.1 galk正反筛选的技术要点 | 第58页 |
| 5.3.2 PRV gE/gI基因 | 第58-60页 |
| 第六章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
