| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第11-30页 |
| 1.1 阿尔茨海默病 | 第11-22页 |
| 1.1.1 AD概述 | 第11页 |
| 1.1.2 AD的发病机制 | 第11-19页 |
| 1.1.2.1 发病机制假说 | 第11-16页 |
| 1.1.2.2 Aβ 代谢相关蛋白与AD | 第16-19页 |
| 1.1.3 AD的治疗现状 | 第19-22页 |
| 1.1.3.1 神经递质替代疗法 | 第19-20页 |
| 1.1.3.2 以Aβ 级联假说为基础的治疗 | 第20-21页 |
| 1.1.3.3 抗炎症和氧化应激为基础的治疗 | 第21-22页 |
| 1.2 酸性成纤维细胞生长因子 | 第22-25页 |
| 1.2.1 aFGF概述 | 第22-23页 |
| 1.2.2 aFGF的功能区与生物学功能 | 第23页 |
| 1.2.3 aFGF的信号通路和作用机制 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 PI3K信号通路 | 第24页 |
| 1.2.3.2 MAPK信号通路 | 第24页 |
| 1.2.3.3 PLCγ 信号通路 | 第24-25页 |
| 1.2.4 aFGF在神经系统疾病中的研究进展 | 第25页 |
| 1.3 提高大分子蛋白药物穿透血脑屏障的方法 | 第25-28页 |
| 1.3.1 Tat-PTD蛋白融合技术 | 第26页 |
| 1.3.2 鼻腔滴注的给药方式 | 第26-27页 |
| 1.3.3 脂质体载体药物递送系统 | 第27-28页 |
| 1.4 课题思路与研究内容 | 第28-29页 |
| 1.4.1 脂质体载体、Tat-PTD蛋白融合、鼻腔滴注联合给药系统及其药效学评价 | 第28-29页 |
| 1.4.2 Tat-haFGF_(14-154) 对AD治疗作用的机制研究 | 第29页 |
| 1.5 技术路线图 | 第29-30页 |
| 第二章 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154) 对APP/PS1小鼠阿尔茨海默症状的改善作用及初步机制研究 | 第30-66页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| 2.1.2 实验试剂与材料 | 第31-33页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第33页 |
| 2.1.4 主要抗体 | 第33-34页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第34页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-49页 |
| 2.2.1 脂质体Tat-haFGF_(14-154)的制备和条件优化 | 第35-37页 |
| 2.2.1.1 脂质体Tat-haFGF_(14-154)的制备 | 第35页 |
| 2.2.1.2 脂质体Tat-haFGF_(14-154)包封率的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.1.3 考马斯亮蓝染色 | 第36-37页 |
| 2.2.2 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154)在正常小鼠脑内分布实验 | 第37-39页 |
| 2.2.2.1 实验动物分组及给药 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 动物取材及样本处理 | 第38页 |
| 2.2.2.3 Western blotting检测脂质体Tat-haFGF_(14-154)在小鼠嗅球和额前皮质的分布 | 第38-39页 |
| 2.2.3 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154)的药效学评价 | 第39-49页 |
| 2.2.3.1 APP/PS1小鼠的基因鉴定 | 第39-41页 |
| 2.2.3.2 实验动物分组及给药 | 第41-42页 |
| 2.2.3.3 行为学检测 | 第42-45页 |
| 2.2.3.4 动物取材及样本处理 | 第45页 |
| 2.2.3.5 小鼠大脑HE染色 | 第45页 |
| 2.2.3.6 免疫组化检测 | 第45-46页 |
| 2.2.3.7 Western blotting检测 | 第46-47页 |
| 2.2.3.8 酶活检测 | 第47-49页 |
| 2.3 数据分析 | 第49-50页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第50-64页 |
| 2.4.1 脂质体Tat-haFGF_(14-154) 制备条件的优化 | 第50-51页 |
| 2.4.1.1 脂质体Tat-haFGF_(14-154)包封率的检测 | 第50-51页 |
| 2.4.1.2 考马斯亮蓝染色检测脂质体Tat-haFGF_(14-154)的聚集 | 第51页 |
| 2.4.2 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154)在正常小鼠嗅球和额前皮质的分布 | 第51-52页 |
| 2.4.3 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154) 对APP/PS1小鼠阿尔茨海默症状的改善作用 | 第52-61页 |
| 2.4.3.1 APP/PS1小鼠基因型鉴定 | 第52-53页 |
| 2.4.3.2 小鼠体重变化 | 第53-54页 |
| 2.4.3.3 小鼠大脑HE染色结果 | 第54-55页 |
| 2.4.3.4 认知行为学实验—水迷宫实验 | 第55-56页 |
| 2.4.3.5 非认知行为学实验 | 第56-58页 |
| 2.4.3.6 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154) 降低AD小鼠脑内Aβ 沉积 | 第58-60页 |
| 2.4.3.7 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154)提高小鼠脑内突触相关蛋白的表达 | 第60-61页 |
| 2.4.4 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154) 改善APP/PS1小鼠阿尔茨海默症状的初步作用机制研究 | 第61-64页 |
| 2.4.4.1 Tat-haFGF_(14-154) 对APP剪切相关蛋白的调节作用 | 第61-62页 |
| 2.4.4.2 Tat-haFGF_(14-154) 对ADAM10和BACE1酶活性的调控作用 | 第62-63页 |
| 2.4.4.3 Tat-haFGF_(14-154) 对Aβ 降解蛋白的调节作用 | 第63-64页 |
| 2.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第三章 Tat-haFGF_(14-154) 对Aβ_(1-42)损伤的大鼠原代皮质神经元的保护作用及其机制研究 | 第66-97页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第66-72页 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 | 第66-67页 |
| 3.1.2 主要试剂与材料 | 第67-69页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第69-70页 |
| 3.1.4 主要抗体 | 第70页 |
| 3.1.5 q-PCR引物 | 第70-71页 |
| 3.1.6 siRNA序列 | 第71页 |
| 3.1.7 抑制剂信息 | 第71页 |
| 3.1.8 主要溶液配制 | 第71-72页 |
| 3.2 实验方法 | 第72-81页 |
| 3.2.1 大鼠原代皮质神经元提取 | 第72-73页 |
| 3.2.2 细胞给药处理及培养 | 第73-74页 |
| 3.2.3 MTT细胞活力检测 | 第74页 |
| 3.2.4 扫描电子显微镜观察细胞表面形态 | 第74-75页 |
| 3.2.5 细胞免疫荧光染色 | 第75-76页 |
| 3.2.6 Western blotting检测蛋白表达 | 第76-78页 |
| 3.2.7 酶活检测 | 第78-79页 |
| 3.2.8 RT-qPCR实验 | 第79-81页 |
| 3.2.9 siRNA干扰实验 | 第81页 |
| 3.3 数据分析 | 第81-82页 |
| 3.4 实验结果 | 第82-95页 |
| 3.4.1 大鼠原代皮质神经元AD细胞模型的建立 | 第82页 |
| 3.4.2 Tat-haFGF_(14-154) 提高Aβ_(1-42)损伤的大鼠原代皮质神经元活力 | 第82-83页 |
| 3.4.3 Tat-haFGF_(14-154) 维持Aβ_(1-42)损伤的大鼠原代皮质神经元结构的完整性 | 第83-84页 |
| 3.4.4 Tat-haFGF_(14-154) 促进原代神经元突触相关蛋白的表达 | 第84-86页 |
| 3.4.5 Tat-haFGF_(14-154) 降低原代神经元内Aβ 的沉积 | 第86页 |
| 3.4.6 Tat-haFGF_(14-154) 对原代神经元Aβ 代谢相关蛋白的调控 | 第86-89页 |
| 3.4.6.1 Tat-haFGF_(14-154) 对原代神经元APP剪切相关蛋白的表达调控 | 第86-87页 |
| 3.4.6.2 Tat-haFGF_(14-154) 对原代神经元ADAM10和BACE1酶活性的调控作用 | 第87-88页 |
| 3.4.6.3 Tat-haFGF_(14-154) 对原代神经元APP剪切产物sAPPα 和sAPPβ 生成的影响 | 第88-89页 |
| 3.4.6.4 Tat-haFGF_(14-154) 对原代神经元Aβ 降解酶的表达调控 | 第89页 |
| 3.4.7 siRNA沉默ADAM10的表达阻断Tat-haFGF_(14-154)对Aβ 损伤神经元的保护作用 | 第89-91页 |
| 3.4.7.1 siRNA干扰降低ADAM10的表达 | 第89-90页 |
| 3.4.7.2 siRNA-ADAM10阻断了Tat-ha FGF14-154的神经保护作用 | 第90-91页 |
| 3.4.8 Tat-haFGF_(14-154) 调控ADAM10表达的信号通路研究 | 第91-94页 |
| 3.4.8.1 体内、外实验证实Tat-haFGF_(14-154)激活XBP1通路 | 第91-93页 |
| 3.4.8.2 体外细胞实验证实Tat-haFGF_(14-154)激活PI3K-CREB-IRE1α/XBP1通路 | 第93-94页 |
| 3.4.9 Tat-haFGF_(14-154) 通过PI3K-CREB-IRE1α/XBP1通路上调ADAM10的表达发挥神经保护作用 | 第94-95页 |
| 3.5 本章小结 | 第95-97页 |
| 第四章 讨论 | 第97-104页 |
| 4.1 鼻腔滴注脂质体Tat-haFGF_(14-154)的新型给药方式 | 第97-98页 |
| 4.2 Tat-haFGF_(14-154) 改善APP/PS1小鼠阿尔茨海默症状并拮抗Aβ 引起的原代皮质神经元损伤 | 第98-99页 |
| 4.3 ADAM10介导Tat-haFGF_(14-154) 发挥神经保护作用 | 第99-101页 |
| 4.4 Tat-haFGF_(14-154) 通过激活PI3K-CREB-IRE1α/XBP1通路上调ADAM10的表达发挥神经保护作用 | 第101-104页 |
| 第五章 结论与展望 | 第104-106页 |
| 5.1 全文总结 | 第104页 |
| 5.2 创新点 | 第104-105页 |
| 5.3 前景与展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 英文缩略词汇总 | 第114-116页 |
| 攻读博士期间科研情况 | 第116-117页 |
| 课题资助及基金支持 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
