猪流行性腹泻病毒全基因组序列测定及截短S基因的原核表达
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-23页 |
| 1 猪流行性腹泻的流行 | 第12-15页 |
| 1.1 国外流行情况 | 第12-14页 |
| 1.2 国内流行情况 | 第14-15页 |
| 2 猪流行性腹泻病毒 | 第15-18页 |
| 2.1 分类地位 | 第15页 |
| 2.2 粒子结构 | 第15页 |
| 2.3 基因组结构 | 第15-16页 |
| 2.4 5'非编码区（UTR）和 3‘UTR | 第16页 |
| 2.5 结构基因及其产物 | 第16-17页 |
| 2.6 非结构基因及其产物 | 第17-18页 |
| 3 PED的诊断 | 第18页 |
| 4 PED的疫苗研究 | 第18-20页 |
| 4.1 灭活苗 | 第18-19页 |
| 4.2 弱毒苗 | 第19页 |
| 4.3 核酸疫苗 | 第19页 |
| 4.4 乳酸杆菌疫苗 | 第19-20页 |
| 4.5 转基因植物疫苗 | 第20页 |
| 5 PEDV S蛋白研究进展 | 第20-21页 |
| 6 抗原表位及其预测 | 第21-22页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第一章 PEDV全基因组序列测定及进化分析 | 第23-58页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1 毒株及菌种 | 第23页 |
| 1.2 试剂 | 第23页 |
| 1.3 仪器设备 | 第23-24页 |
| 1.4 分子生物学软件 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 引物合成 | 第24-25页 |
| 2.2 病毒RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.3 cDNA合成 | 第26页 |
| 2.4 病毒基因组中间序列测定 | 第26-27页 |
| 2.5 病毒基因组末端序列测定 | 第27-28页 |
| 2.6 连接 | 第28页 |
| 2.7 感受态制备 | 第28-29页 |
| 2.8 转化 | 第29页 |
| 2.9 质粒的提取与鉴定 | 第29页 |
| 2.10 全基因组序列确定、分析、比较 | 第29页 |
| 2.11 参考序列 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-56页 |
| 3.1 全基因组RT-PCR扩增结果 | 第30-32页 |
| 3.2 基因组结构 | 第32页 |
| 3.3 全基因组遗传进化分析 | 第32-34页 |
| 3.4 5'UTR | 第34-36页 |
| 3.5 ORF1a基因 | 第36-38页 |
| 3.6 S蛋白遗传进化分析 | 第38-42页 |
| 3.7 ORF3遗传进化分析 | 第42-43页 |
| 3.8 E蛋白遗传进化分析 | 第43-47页 |
| 3.9 M蛋白遗传进化分析 | 第47-50页 |
| 3.10 N蛋白遗传进化分析 | 第50-53页 |
| 3.11 3'UTR分析 | 第53-55页 |
| 3.12 全基因组同源重组分析 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 全基因组序列分析 | 第56页 |
| 4.2 S基因及S蛋白 | 第56页 |
| 4.3 ORF3 | 第56-57页 |
| 4.4 M | 第57页 |
| 4.5 N | 第57-58页 |
| 第二章 PEDV截短S基因原核表达及高免血清制备 | 第58-71页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 毒株和菌种 | 第58页 |
| 1.2 试剂 | 第58页 |
| 1.3 仪器设备 | 第58-59页 |
| 1.4 分子生物学分析网站及软件 | 第59页 |
| 2 试验方法 | 第59-64页 |
| 2.1 S蛋白抗原表位预测 | 第59页 |
| 2.2 引物设计 | 第59-60页 |
| 2.3 病毒RNA提取 | 第60页 |
| 2.4 cDNA合成 | 第60页 |
| 2.5 目的基因扩增 | 第60页 |
| 2.6 目的基因纯化 | 第60页 |
| 2.7 原核表达载体构建 | 第60-61页 |
| 2.8 重组表达质粒诱导表达 | 第61页 |
| 2.9 表达蛋白的电泳分析 | 第61页 |
| 2.10 重组蛋白细胞定位分析 | 第61-62页 |
| 2.11 重组蛋白纯化 | 第62页 |
| 2.12 PEDV多抗血清制备 | 第62页 |
| 2.13 ELISA | 第62-63页 |
| 2.14 Western-Blot | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-70页 |
| 3.1 Prorean翻译结果 | 第64页 |
| 3.2 抗原表位预测结果 | 第64-65页 |
| 3.3 引物设计及基因片段扩增结果 | 第65-66页 |
| 3.4 基因片段双酶切鉴定结果 | 第66-67页 |
| 3.5 表达蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第67页 |
| 3.6 重组蛋白细胞定位分析 | 第67-68页 |
| 3.7 ELISA检测抗体水平 | 第68-69页 |
| 3.8 目的蛋白的Western-Blot | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第77页 |
