| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 本研究的主要创新点 | 第12-13页 |
| 文中使用的英文缩写列表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-50页 |
| 1.1 嗜盐古生菌的类型与分布 | 第16-20页 |
| 1.1.1 古生菌概念的提出 | 第16-17页 |
| 1.1.2 嗜盐古生菌的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 嗜盐古生菌的生存环境 | 第18-20页 |
| 1.2 嗜盐古生菌的生物学特征 | 第20-27页 |
| 1.2.1 嗜盐古生菌的基本生理特征 | 第20-21页 |
| 1.2.2 嗜盐古生菌的代谢 | 第21-22页 |
| 1.2.3 嗜盐古生菌的基因组 | 第22-23页 |
| 1.2.4 嗜盐古生菌对高盐环境的适应机制 | 第23-27页 |
| 1.3 嗜盐古生菌的蛋白酶 | 第27-31页 |
| 1.3.1 嗜盐古生菌的胞内蛋白酶 | 第27-30页 |
| 1.3.2 嗜盐古生菌的胞外蛋白酶 | 第30-31页 |
| 1.4 枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶(Subtilase) | 第31-34页 |
| 1.4.1 Subtilase的分类及作用机理 | 第31-33页 |
| 1.4.2 Subtilase的成熟过程 | 第33-34页 |
| 1.5 古生菌的细胞壁、膜结构 | 第34-37页 |
| 1.5.1 古生菌的细胞壁与S层 | 第34-36页 |
| 1.5.2 古生菌的细胞膜 | 第36-37页 |
| 1.6 嗜盐古生菌蛋白质的跨膜转运 | 第37-48页 |
| 1.6.1 信号肽和信号肽酶 | 第38-41页 |
| 1.6.2 古生菌蛋白的分泌途径 | 第41-48页 |
| 1.7 本研究的背景、目的和内容 | 第48-50页 |
| 第二章 材料与方法 | 第50-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第50-57页 |
| 2.1.1 菌株 | 第50页 |
| 2.1.2 质粒 | 第50-52页 |
| 2.1.3 药品及培养基 | 第52-54页 |
| 2.1.4 溶液的配制 | 第54-57页 |
| 2.1.5 仪器 | 第57页 |
| 2.2 实验方法 | 第57-70页 |
| 2.2.1 嗜盐古生菌Natrinema sp.J7-2基因组DNA的提取 | 第57页 |
| 2.2.2 碱裂解法提取质粒 | 第57-58页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第58-62页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备以及连接产物的转化 | 第62-63页 |
| 2.2.5 质粒转化沃氏富盐菌(Hfx.volcanii WFD11) | 第63页 |
| 2.2.6 重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及粗酶液的获得 | 第63-64页 |
| 2.2.7 在沃氏富盐菌(Hfx.volcanii WFD11)中表达蛋白质 | 第64页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第64-65页 |
| 2.2.9 蛋白质的变性和复性 | 第65页 |
| 2.2.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第65-66页 |
| 2.2.11 Western-blot | 第66-67页 |
| 2.2.12 蛋白质N末端测序(N-terminal amino acid analysis) | 第67页 |
| 2.2.13 蛋白质浓度测定 | 第67页 |
| 2.2.14 蛋白酶酶活的测定 | 第67-68页 |
| 2.2.15 嗜盐古生菌胞内钠离子、钾离子浓度的测定 | 第68-70页 |
| 第三章 嗜盐蛋白酶SptA的自加工成熟机制 | 第70-97页 |
| 3.1 SptA在大肠杆菌中的表达和活化 | 第70-73页 |
| 3.2 重组SptA(JAH)的变性、复性及自加工成熟 | 第73-80页 |
| 3.2.1 JAH的柱上复性和自加工成熟 | 第74页 |
| 3.2.2 JAH的十倍稀释复性和自加工成熟过程 | 第74-78页 |
| 3.2.3 盐离子和盐浓度对JAH自加工成熟的影响 | 第78-80页 |
| 3.3 信号肽及N端前肽在JAH自加工成熟中的作用 | 第80-83页 |
| 3.4 C端延伸区的作用 | 第83-86页 |
| 3.4.1 JA△CH的柱上复性和自加工成熟 | 第84页 |
| 3.4.2 JA△CH的十倍稀释复性和自加工成熟 | 第84-86页 |
| 3.5 不同结构域在复性及成熟过程中的结构变化 | 第86-91页 |
| 3.6 讨论 | 第91-96页 |
| 3.7 本章小结 | 第96-97页 |
| 第四章 重组SptA的分泌、成熟及对细胞生长的影响 | 第97-117页 |
| 4.1 重组SptA及其突变体的构建 | 第97-98页 |
| 4.2 Tat信号肽介导的重组SptA及其活性位点突变体在Hfx.volcanii中的表达与分泌 | 第98-101页 |
| 4.3 Sec信号肽介导的重组SptA及其活性位点突变体在Hfx.volcanii中的表达与分泌 | 第101-103页 |
| 4.4 重组SptA信号肽双精氨酸突变体在Hfx.volcanii中表达、分泌及对细胞生长的影响 | 第103-109页 |
| 4.4.1 重组菌株的菌落特征 | 第103-104页 |
| 4.4.2 重组菌株在摇瓶培养条件下的生长及重组蛋白的表达与分泌 | 第104-107页 |
| 4.4.3盐浓度对重组菌株及重组蛋白表达的影响 | 第107页 |
| 4.4.4重组SptA信号狀双精氨酸突变体在细胞中的折叠状态 | 第107-109页 |
| 4.5 SptA的折叠状态与其在Hfx.volcanii中分泌的相关性 | 第109-112页 |
| 4.5.1 重组SptA的N端前肽缺失突变体在Hfx.volcanii中的表达与分泌 | 第109-110页 |
| 4.5.2 Tat信号肽与Sec信号肽介导的C端延伸区在Hfx.volcanii中的分泌 | 第110-112页 |
| 4.6 讨论 | 第112-116页 |
| 4.7 本章小结 | 第116-117页 |
| 第五章 SptA在Natrinema sp.J7-2中的表达与分泌 | 第117-129页 |
| 5.1 SptA在Natrinema sp.J7-2中的表达、分泌及对细胞生长的影响 | 第117-120页 |
| 5.2 Natrinema sp.J7-2细胞内的K~+、Na~+浓度 | 第120-121页 |
| 5.3 Natrinema sp.J7-2的蛋白质降解体系在SptA分泌过程中的作用 | 第121-126页 |
| 5.3.1 细胞可溶组分对SptA折叠及成熟的影响 | 第121-122页 |
| 5.3.2 细胞可溶组分对SptA的降解作用 | 第122-126页 |
| 5.4 讨论 | 第126-128页 |
| 5.5 本章小结 | 第128-129页 |
| 全文总结与展望 | 第129-132页 |
| 参考文献 | 第132-148页 |
| 在读期间发表论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
