| 内容摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 布鲁菌病 | 第9页 |
| 1.2 流行状况 | 第9-10页 |
| 1.3 防控策略 | 第10-11页 |
| 1.4 致病机制 | 第11页 |
| 1.5 毒力相关因子研究进展 | 第11-14页 |
| 1.5.1 脂多糖结构 | 第12页 |
| 1.5.2 四型分泌系统 | 第12-13页 |
| 1.5.3 双组份调控系统 | 第13页 |
| 1.5.4 环β-葡聚糖结构 | 第13-14页 |
| 1.5.5 其他因子 | 第14页 |
| 1.6 总结 | 第14页 |
| 1.7 本文工作简介 | 第14-16页 |
| 第二章 流产布鲁菌毒力相关基因鉴定 | 第16-33页 |
| 2.1 前言 | 第16页 |
| 2.2 材料与方法 | 第16-20页 |
| 2.2.1 菌株、实验动物 | 第16页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第17页 |
| 2.2.5 探针制备 | 第17-18页 |
| 2.2.6 细菌基因组提取与酶切 | 第18页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第18页 |
| 2.2.8 凝胶变性与中和 | 第18-19页 |
| 2.2.9 转印试验 | 第19页 |
| 2.2.10 热固定核酸 | 第19页 |
| 2.2.11 杂交试验 | 第19页 |
| 2.2.12 免疫检测 | 第19页 |
| 2.2.13 突变株毒力评价 | 第19-20页 |
| 2.2.14 生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-27页 |
| 2.3.1 探针制备 | 第20-21页 |
| 2.3.2 细菌基因组酶切分析 | 第21页 |
| 2.3.3 细菌Southern Blot结果 | 第21-22页 |
| 2.3.4 布鲁菌突变株毒力及失活基因分析 | 第22-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-33页 |
| 第三章 pTM系列质粒构建及应用 | 第33-46页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 材料与方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 菌株和细胞 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂和抗体 | 第33-34页 |
| 3.2.3 质粒构建PCR反应条件 | 第34-36页 |
| 3.2.4 质粒构建方法 | 第36-37页 |
| 3.2.5 感受态细胞制备以及电转化 | 第37-38页 |
| 3.2.6 免疫印迹 | 第38页 |
| 3.2.7 细胞感染方法 | 第38页 |
| 3.2.8 间接免疫荧光试验 | 第38-39页 |
| 3.3 结果 | 第39-43页 |
| 3.3.1 pTM系列质粒构建结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 pGH质粒表达外源蛋白结果 | 第40-42页 |
| 3.3.3 pZT质粒诱导表达外源蛋白结果 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 LsrB调控布鲁菌毒力的分子机制 | 第46-67页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-51页 |
| 4.2.1 菌株及细胞 | 第46页 |
| 4.2.2 试剂及抗体 | 第46-47页 |
| 4.2.3 LsrB蛋白表达以及抗体制备 | 第47-48页 |
| 4.2.4 缺失株及互补株构建 | 第48-49页 |
| 4.2.5 耐受性试验 | 第49页 |
| 4.2.6 细胞感染试验 | 第49-50页 |
| 4.2.7 动物试验 | 第50页 |
| 4.2.8 间接免疫荧光试验 | 第50页 |
| 4.2.9 实时荧光定量分析 | 第50-51页 |
| 4.3 结果 | 第51-64页 |
| 4.3.1 LsrB蛋白保守性分析 | 第51-52页 |
| 4.3.2 缺失株和回复株构建结果 | 第52-53页 |
| 4.3.3 LsrB缺失影响布鲁菌体外生长 | 第53-54页 |
| 4.3.4 LsrB缺失减弱布鲁菌毒力 | 第54-55页 |
| 4.3.5 LsrB蛋白调控布鲁菌抵抗压力应激 | 第55-56页 |
| 4.3.6 LsrB蛋白调控布鲁菌抑制巨噬细胞激活 | 第56-59页 |
| 4.3.7 LsrB蛋白调控影响布鲁菌胞内移行 | 第59-60页 |
| 4.3.8 LsrB调控布鲁菌小RNA abcR2表达 | 第60-62页 |
| 4.3.9 LsrB蛋白半胱氨酸突变影响调控活性 | 第62-63页 |
| 4.3.10 LsrB调控不同菌株具有相似调控机制 | 第63-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录1 博后期间发表文章列表 | 第73-74页 |
| 附录2 博后期间申请课题列表 | 第74-75页 |
| 附件 | 第75页 |
