| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 果蝇作为模式生物的研究历史 | 第9-10页 |
| 1.1.1 果蝇作为模式生物的优势 | 第9-10页 |
| 1.1.2 果蝇作为模式生物的应用 | 第10页 |
| 1.2 昆虫抗药性机制的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 代谢抗性 | 第11-12页 |
| (1) 谷胱甘肽-S-转移酶(GST) | 第11页 |
| (2) 细胞色素P450 | 第11-12页 |
| (3) 非专一性酯酶 | 第12页 |
| 1.2.2 靶标抗性 | 第12-13页 |
| (1) 神经轴突钠离子通道(SC) | 第12页 |
| (2) γ-氨基丁酸(GABA)受体-氯离子通道复合体 | 第12-13页 |
| (3) 乙酰胆碱酯酶（AChE) | 第13页 |
| 1.3 抗药性的防治策略 | 第13-14页 |
| 1.3.1 研发新型杀虫剂 | 第13页 |
| 1.3.2 多种杀虫剂混合使用 | 第13页 |
| 1.3.3 改变杀虫剂施药方式 | 第13-14页 |
| 1.4 小GTP蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4.0 小GTP蛋白概述 | 第14页 |
| 1.4.1 小GTP蛋白的结构与调节机制 | 第14页 |
| 1.4.2 小G蛋白在昆虫信号转导中的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 蛋白质双向电泳技术研究进展 | 第15-17页 |
| 第2章 果蝇细胞核差异表达蛋白的分离与鉴定 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.1.1 供试果蝇细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第17-20页 |
| 2.2.2 蛋白样品制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2.1 果蝇细胞细胞核蛋白的提取 | 第20页 |
| 2.2.2.2 蛋白质样品的纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.2.3 蛋白标准曲线的制备和浓度检测 | 第21页 |
| 2.2.3 双向电泳 | 第21-23页 |
| 2.2.3.1 等电聚焦电泳(IEF) | 第21-22页 |
| 2.2.3.2 第二向SDS-PAGE电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.4 凝胶图像采集和蛋白点分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4.1 银染 | 第23-24页 |
| 2.2.4.2 凝胶扫描与图像分析 | 第24页 |
| 2.2.5 质谱鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5.1 取点 | 第24页 |
| 2.2.5.2 蛋白胶内酶解 | 第24页 |
| 2.2.5.3 MALDI-TOF-TOF 质谱 | 第24-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.3.1 蛋白质样品的浓度测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 蛋白质双向电泳图谱 | 第26-28页 |
| 2.3.2.1 pH 3-10,11cm非线性固相胶条图像 | 第26-27页 |
| 2.3.2.2 pH 3-10,17cm非线性固相胶条图像 | 第27-28页 |
| 2.3.3 差异蛋白点的质谱鉴定结果 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-33页 |
| 2.4.1 双向电泳图谱分析 | 第29-30页 |
| 2.4.2 质谱鉴定结果分析 | 第30-33页 |
| 第3章 Ran与Kc细胞溴氰菊酯应激关系研究 | 第33-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 果蝇Kc细胞 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-45页 |
| 3.2.1 荧光定量PCR | 第33-35页 |
| 3.2.1.1 RNA的提取和反转录 | 第33-34页 |
| 3.2.1.2 RNA浓度和纯度测定 | 第34页 |
| 3.2.1.3 RNA反转录成cDNA第一链 | 第34-35页 |
| 3.2.1.4 RT-PCR反应 | 第35页 |
| 3.2.2 免疫印迹分析 | 第35-38页 |
| 3.2.2.1 蛋白质提取及浓度测量 | 第35页 |
| 3.2.2.2 Western blot分析 | 第35-38页 |
| 3.2.2.2.1 试剂配制及方法步骤 | 第35-37页 |
| 3.2.2.2.2 方法步骤 | 第37-38页 |
| 3.2.3 Ran转染果蝇Kc细胞 | 第38-43页 |
| 3.2.3.1 Ran表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.3.2 基因Ran稳定转染Kc细胞 | 第41-43页 |
| 3.2.4 dsRNA干扰果蝇Kc细胞 | 第43-45页 |
| 3.2.4.1 RNA的提取和反转录 | 第43页 |
| 3.2.4.2 dsRNA合成 | 第43-44页 |
| 3.2.4.3 dsRNA转染Kc细胞 | 第44-45页 |
| 3.2.5 细胞毒性检测 | 第45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-49页 |
| 3.3.1 RT-PCR检测Ran在deltamethrin处理下的mRNA表达量 | 第45-46页 |
| 3.3.2 Western bolt检测Ran溴氰菊酯诱导下蛋白表达量 | 第46-47页 |
| 3.3.3 RT-PCR和Western bolt检测Ran的转染效率 | 第47-48页 |
| 3.3.4 转染组与干扰组细胞deltamethrin敏感性数据分析 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 读学位期间的研究成果与发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
