| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-28页 |
| ·病原分类地位 | 第14页 |
| ·流行病学特点 | 第14-15页 |
| ·EDSV病原基本生物学特性 | 第15-16页 |
| ·致病机理 | 第16页 |
| ·EDSV主要结构蛋白及功能 | 第16-18页 |
| ·六邻体蛋白 | 第16-17页 |
| ·DNA结合蛋白 | 第17页 |
| ·末端前体蛋白 | 第17页 |
| ·纤维蛋白 | 第17页 |
| ·PVⅡ蛋白 | 第17-18页 |
| ·五邻体蛋白 | 第18页 |
| ·减蛋综合征的诊断和检测技术 | 第18-21页 |
| ·临床诊断 | 第18-19页 |
| ·剖检以及组织学诊断 | 第19页 |
| ·实验室诊断 | 第19-21页 |
| ·病原分离和鉴定 | 第19页 |
| · | 第19-20页 |
| ·琼脂扩散(AGP)试验 | 第19-20页 |
| ·病毒中和试验(SN) | 第20页 |
| ·分子生物学诊断 | 第20-21页 |
| ·探针技术 | 第20页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第20页 |
| ·斑点酶联免疫吸附试验 | 第20-21页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第21页 |
| ·减蛋综合征的预防与治疗 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量PCR检测方法 | 第22-27页 |
| ·实时荧光定量的分类及工作原理 | 第22-26页 |
| ·染料法 | 第22-24页 |
| ·Taqman荧光定量PCR | 第24页 |
| ·分子信标（Beacon）法 | 第24-25页 |
| ·双杂交探针（Light cycler） | 第25-26页 |
| ·实时荧光定量PCR方法的应用 | 第26-27页 |
| ·在动物病毒检测和鉴定上的应用 | 第26页 |
| ·细胞因子表达定量检测 | 第26页 |
| ·在细菌病诊断中的应用 | 第26页 |
| ·FQ-PCR在其他方面的应用 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-38页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·病毒 | 第28页 |
| ·试验动物 | 第28页 |
| ·仪器和试剂 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·人工攻毒试验 | 第30页 |
| ·病毒的增殖 | 第30页 |
| ·攻毒试验 | 第30页 |
| ·抗体滴度及细胞因子的检测 | 第30-31页 |
| ·病理组织学观察 | 第31-32页 |
| ·石蜡切片制作步骤 | 第31页 |
| ·HE染色步骤 | 第31-32页 |
| ·Taqman-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 | 第32-37页 |
| ·EDSV引物和探针设计 | 第32页 |
| ·病料组织中总DNA的提取 | 第32页 |
| ·目的基因PCR产物的扩增及克隆测序 | 第32-35页 |
| ·EDSV基因的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR反应 | 第33页 |
| ·目的片段的纯化回收 | 第33-34页 |
| ·胶回收产物与pMD18-T载体连接 | 第34页 |
| ·CaCl2法制备感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·荧光定量PCR反应体系以及反应条件的优化 | 第36-37页 |
| ·引物和探针浓度的优化 | 第36页 |
| ·最佳退火温度的优化 | 第36-37页 |
| ·荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR反应的特异性 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR反应的敏感性 | 第37页 |
| ·荧光定量PCR反应的重复性 | 第37页 |
| ·EDSV在试验鸭各组织中的分布情况 | 第37页 |
| ·各组织总DNA的提取 | 第37页 |
| ·病料中EDSV的荧光定量检测 | 第37页 |
| ·荧光定量检测试验鸭排毒情况 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-47页 |
| ·人工攻毒试验结果 | 第38-42页 |
| ·人工感染鸭的临床症状及剖检变化 | 第38页 |
| ·人工感染鸭的产蛋量变化 | 第38-39页 |
| ·抗体滴度及细胞因子检测结果 | 第39页 |
| ·人工感染种鸭的病理组织学变化 | 第39-42页 |
| ·Taqman-MGB荧光定量PCR检测EDSV方法的建立 | 第42-45页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定及其测序鉴定结果 | 第42页 |
| ·Taqman-MGB荧光定量PCR反应体系以及反应条件的优化 | 第42-43页 |
| ·Taqman-MGB荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第43页 |
| ·特异性试验结果 | 第43-44页 |
| ·敏感性试验结果 | 第44-45页 |
| ·重复性试验结果 | 第45页 |
| ·试验种鸭各组织中EDSV的分布情况 | 第45-46页 |
| ·试验种鸭棉拭子排毒规律 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
