农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化体系的构建
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 斑玉蕈概述 | 第12-15页 |
| ·斑玉蕈的分类地位和分布 | 第12页 |
| ·斑玉蕈的分类地位 | 第12页 |
| ·斑玉蕈的自然分布和人工栽培 | 第12页 |
| ·斑玉蕈的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·形态特征 | 第12页 |
| ·生长发育条件 | 第12-13页 |
| ·斑玉蕈子实体发育过程 | 第13-15页 |
| ·菌丝转色期 | 第14页 |
| ·菌芽期 | 第14页 |
| ·钉头期 | 第14页 |
| ·扁球期 | 第14-15页 |
| ·成熟期 | 第15页 |
| 2 食用菌基因工程技术 | 第15-20页 |
| ·筛选标记的选择 | 第15-16页 |
| ·抗生素抗性标记 | 第15-16页 |
| ·营养缺陷型筛选标记 | 第16页 |
| ·代谢产物抗性选择标记 | 第16页 |
| ·启动子的选择 | 第16-17页 |
| ·遗传转化方法 | 第17-19页 |
| ·PEG介导转化法 | 第17-18页 |
| ·电激转化法 | 第18页 |
| ·基因枪法 | 第18页 |
| ·限制性内切酶介导的整合法 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化法 | 第19页 |
| ·转基因的整合方式 | 第19-20页 |
| 3 根癌农杆菌介导的食用菌遗传转化的研究 | 第20-26页 |
| ·根癌农杆菌介导的食用菌遗传转化的分子原理 | 第20-21页 |
| ·ATMT转化中所用的载体系统 | 第21-22页 |
| ·ATMT技术在食用菌中的研究状况 | 第22-24页 |
| ·影响食用菌ATMT转化效率的因素 | 第24-26页 |
| ·农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第24页 |
| ·元载体上启动子对转化效率的影响 | 第24-25页 |
| ·受体材料对转化效率的影响 | 第25页 |
| ·共培养时间和温度对转化效率的影响 | 第25页 |
| ·AS对转化效率的影响 | 第25-26页 |
| ·食用菌ATMT研究中存在的问题 | 第26页 |
| 4 ATMT在食用菌遗传学研究中的应用 | 第26-28页 |
| ·ATMT介导的随机基因标记 | 第27页 |
| ·ATMT介导的定向基因突变 | 第27-28页 |
| 5 本研究的主要内容及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 斑玉蕈的ATMT转化方法的初步建立 | 第30-40页 |
| 1 试验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·酶和化学试剂 | 第30页 |
| ·PCR引物 | 第30页 |
| ·培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2 试验方法 | 第31-35页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与载体转化 | 第31-32页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·斑玉蕈表达载体转化农杆菌菌株 | 第32页 |
| ·农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化 | 第32-34页 |
| ·斑玉蕈SIEF3133菌株对潮霉素的敏感性试验 | 第32-33页 |
| ·头孢噻肟钠对农杆菌和斑玉蕈菌丝的毒性试验 | 第33页 |
| ·农杆菌转化受体的制备 | 第33页 |
| ·农杆菌介导斑玉蕈转化的步骤 | 第33-34页 |
| ·斑玉蕈转化子的PCR验证 | 第34页 |
| ·转化子的有丝分裂稳定性分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·表达载体转化农杆菌LBA4404菌株 | 第35页 |
| ·斑玉蕈SIEF3133菌株对潮霉素的敏感性试验 | 第35-36页 |
| ·头孢噻肟钠对农杆菌和斑玉蕈菌丝的毒性试验 | 第36页 |
| ·初筛转化子的PCR检测及测序验证 | 第36-38页 |
| ·抗性转化子的复筛 | 第38-39页 |
| ·斑玉蕈转化子的遗传稳定性试验 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 影响斑玉蕈ATMT转化效率的因素优化 | 第40-48页 |
| 1 试验材料 | 第40页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·酶和化学试剂 | 第40页 |
| ·PCR引物 | 第40页 |
| ·培养基的配制 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-41页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第40页 |
| ·预培养的农杆菌菌液浓度对转化率的影响 | 第40-41页 |
| ·菌丝在农杆菌菌液中浸染时间对转化率的影响 | 第41页 |
| ·共培养温度对转化率的影响 | 第41页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第41页 |
| ·AS的浓度对转化率的影响 | 第41页 |
| ·斑玉蕈转化子的数量统计 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·不同农杆菌菌株对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| ·预培养的农杆菌菌液的浓度对转化率的影响 | 第42-43页 |
| ·菌丝在农杆菌菌液中浸染的时间对转化率的影响 | 第43页 |
| ·共培养温度对转化率的影响 | 第43-44页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第44页 |
| ·AS的浓度对转化率的影响 | 第44-45页 |
| ·斑玉蕈转化子的数量统计 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 第四章 斑玉蕈转化子的相关分析和结实性试验 | 第48-56页 |
| 1 试验材料 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·酶和化学试剂 | 第48页 |
| ·PCR引物 | 第48页 |
| ·培养基的配制 | 第48页 |
| 2 试验方法 | 第48-50页 |
| ·斑玉蕈转化子的绿色荧光检测 | 第48页 |
| ·斑玉蕈转化子中kan基因的PCR检测 | 第48-49页 |
| ·斑玉蕈转化子的菌落形态观察及结实性试验 | 第49页 |
| ·结实的斑玉蕈转化子中hph基因的PCR验证 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·斑玉蕈转化子中egfp报告基因表达情况分析 | 第50页 |
| ·斑玉蕈转化子中kan基因的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·斑玉蕈转化子的菌落形态观察和结实性试验 | 第51-52页 |
| ·结实的斑玉蕈转化子中hph基因的验证 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 总结与展望 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 1 常用试剂的配制 | 第58-59页 |
| 2 CTAB法提取斑玉蕈基因组DNA | 第59页 |
| 3 碱裂解法提取质粒 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
