| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 英文缩略词 | 第9-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| ·无乳链球菌研究简介 | 第13-16页 |
| ·无乳链球菌生物学特性 | 第13-14页 |
| ·无乳链球菌致病机理 | 第14页 |
| ·患病症状与组织病理学 | 第14-15页 |
| ·GAPDH、SIP 基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·无乳链球菌病的防控措施 | 第16-17页 |
| ·常规防治 | 第16页 |
| ·疫苗防治 | 第16-17页 |
| ·鱼类疫苗的研究进展 | 第17-21页 |
| ·传统疫苗 | 第17-18页 |
| ·基因工程疫苗 | 第18页 |
| ·影响疫苗效果的因素 | 第18-20页 |
| ·亚单位疫苗的优缺点 | 第20页 |
| ·DNA 疫苗的优缺点 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 2 罗非鱼源无乳链球菌 GAPDH、SIP、SIP-GAPDH 基因的扩增、原核表达重组质粒及真核表达重组质粒的构建 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·质粒和受体菌 | 第24页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·罗非鱼源无乳链球菌 GAPDH、SIP 基因的扩增及 SIP-GAPDH 基因的融合构建 | 第25-30页 |
| ·GAPDH、SIP、SIP-GAPDH 基因的原核表达 | 第30-32页 |
| ·GAPDH、SIP、SIP-GAPDH 基因真核载体的构建 | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·GAPDH、SIP 基因扩增及 SIP-GAPDH 基因的融合构建结果分析 | 第34-35页 |
| ·GAPDH、SIP、SIP-GAPDH 基因的原核表达结果分析 | 第35-40页 |
| ·GAPDH、SIP、SIP -GAPDH 基因真核载体的构建结果分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 3 SIP-GAPDH 嵌合型亚单位疫苗免疫保护性研究 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·实验鱼 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·所用溶液 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·抗原准备 | 第44-45页 |
| ·安全性评估 | 第45页 |
| ·实验鱼处理及免疫 | 第45页 |
| ·采血与攻毒 | 第45页 |
| ·血清抗体效价的测定 | 第45-46页 |
| ·qRT-PCR 分析罗非鱼免疫相关基因差异表达 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-53页 |
| ·安全性评估 | 第47页 |
| ·抗体效价检测 | 第47-48页 |
| ·免疫保护率计算 | 第48页 |
| ·病原菌检测 | 第48-49页 |
| ·qRT-PCR 罗非鱼免疫相关基因差异表达分析 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 4 GAPDH、SIP、SIP-GAPDH 基因 DNA 疫苗效果研究 | 第55-71页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·实验鱼 | 第55-56页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·真核质粒的大量抽提 | 第56-57页 |
| ·实验鱼处理及免疫 | 第57页 |
| ·mRNA 水平检测各基因表达情况 | 第57-58页 |
| ·罗非鱼体内重组质粒分布的 PCR 检测结果 | 第58-59页 |
| ·采血与间接 ELISA 检测抗体效价 | 第59页 |
| ·攻毒保护试验 | 第59-60页 |
| ·qRT-PCR 分析罗非鱼免疫相关基因差异表达 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-68页 |
| ·质粒纯度检测 | 第60页 |
| ·目的基因的 RT-PCR 检测结果 | 第60-62页 |
| ·重组质粒在罗非鱼各组织的 PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·抗体效价检测 | 第63-64页 |
| ·免疫保护率计算 | 第64页 |
| ·qRT-PCR 罗非鱼免疫相关基因差异表达的结果分析 | 第64-68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
| 导师简介 | 第82页 |
