| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-31页 |
| 第一节 钙库操纵的钙内流 | 第11-18页 |
| ·细胞内的钙离子信号与钙通道 | 第11-12页 |
| ·SOCE及调控机制 | 第12-14页 |
| ·TRPC通道 | 第14-15页 |
| ·ARC通道 | 第15-16页 |
| ·SOCE与T细胞活化 | 第16-18页 |
| ·SOCE与疾病 | 第18页 |
| 第二节 STIM1和Orai的相互作用研究进展 | 第18-30页 |
| ·STIM1结构与功能 | 第18-22页 |
| ·Orai结构与功能 | 第22-26页 |
| ·相互作用研究现状 | 第26-27页 |
| ·蛋白质相互作用主要研究方法 | 第27-30页 |
| 第三节 本论文研究意义 | 第30-31页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第31-42页 |
| 第一节 实验材料 | 第31-33页 |
| ·生物材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| 第二节 实验方法 | 第33-42页 |
| ·质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第35-37页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹 | 第37-38页 |
| ·Pull down | 第38-40页 |
| ·胰蛋白酶保护实验 | 第40页 |
| ·圆二色谱 | 第40页 |
| ·细胞培养、转染和免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·免疫荧光 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果 | 第42-65页 |
| 第一节 STIM1 C端不同结构域的纯化与分析 | 第42-45页 |
| ·STIM1 C端序列分析 | 第42-43页 |
| ·STIM1不同片段的表达纯化 | 第43-44页 |
| ·STIM1不同片段的超速离心分析 | 第44-45页 |
| 第二节 Orai多肽与STIM1的结合能力分析 | 第45-50页 |
| ·Orail和orai3多肽与STIM1的结合 | 第45-47页 |
| ·Orai3 N端和C端多肽与STIM1不同片段的结合能力的分析 | 第47-48页 |
| ·Orai3 N端和C端的竞争性相互作用实验 | 第48-49页 |
| ·Orai N端引起STIM1的构象改变 | 第49-50页 |
| 第三节 STIM1与Orai3 N端相互作用分析 | 第50-52页 |
| 第四节 STIM1与Orai C端相互作用分析 | 第52-61页 |
| ·Orai C端RSLV模块突变分析 | 第52-53页 |
| ·Orai C端负电氨基酸突变分析 | 第53-54页 |
| ·Orai C端疏水性氨基酸突变分析 | 第54-56页 |
| ·Orai 3 C端在细胞内的作用分析 | 第56-59页 |
| ·Orai3 C端结合能力更强原因分析 | 第59-61页 |
| 第五节 STIM1蛋白与Orai相互作用结合位点分析 | 第61-65页 |
| ·STIM1蛋白正电荷氨基酸突变分析 | 第61-62页 |
| ·STIM1与Orai3 C端正负电荷相互作用分析 | 第62-63页 |
| ·STIM1 SOAR结构域正电荷团簇K382-R387作用分析 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 第六章 RHD3介导内质网同源膜融合的机制研究 | 第69-86页 |
| 第一节 引言 | 第69-73页 |
| ·内质网的形态与功能 | 第69-71页 |
| ·内质网膜融合蛋白 | 第71-73页 |
| 第二节 实验方法 | 第73-80页 |
| ·质粒构建 | 第73页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第73-74页 |
| ·蛋白结晶 | 第74-75页 |
| ·GTP酶活性测定 | 第75-76页 |
| ·脂质体的制备 | 第76-77页 |
| ·蛋白脂质体的重组 | 第77页 |
| ·蛋白脂质体的体外融合实验 | 第77-78页 |
| ·蛋白脂质体的重组效率检测 | 第78-80页 |
| 第三节 结果分析 | 第80-86页 |
| ·RHD3 stalk(273-558)的纯化和结晶 | 第80-81页 |
| ·RHD3和RL2全长蛋白脂质体重组 | 第81-82页 |
| ·RHD3和RL2蛋白GTP酶活检测 | 第82-83页 |
| ·RHD3和RL2蛋白融合活性检测 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第93页 |
