| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 综述部分 | 第9-21页 |
| 一、肝纤维化的研究进展 | 第9-13页 |
| 1 肝纤维化简介 | 第9页 |
| 2 肝纤维化发生的机理 | 第9-11页 |
| ·肝脏构造 | 第9-10页 |
| ·肝纤维化发生机理 | 第10-11页 |
| 3 肝细胞上皮间质转化在肝纤维化发生过程中的作用 | 第11-12页 |
| 4 肝纤维化动物模型 | 第12-13页 |
| ·化学药物或毒物所致肝纤维化实验动物模型 | 第12页 |
| ·胆管阻塞性肝纤维化模型(bile duct ligation,BDL) | 第12页 |
| ·慢性酒精中毒性肝纤维化动物模型 | 第12-13页 |
| ·免疫法建立肝纤维化模型 | 第13页 |
| ·营养性肝纤维化动物模型 | 第13页 |
| 二、肝星状细胞在肝纤维化发生过程中的作用机制 | 第13-15页 |
| 1 肝星状细胞的功能 | 第13页 |
| 2 与肝星状细胞激活有关的信号通路 | 第13-15页 |
| ·PDGF/Erk信号通路 | 第14页 |
| ·TGF-β/Smad信号通路 | 第14-15页 |
| ·肝星状细胞参与免疫应答反应 | 第15页 |
| 三、糖基化在肝纤维化发生过程中的作用机制 | 第15-18页 |
| 1 β1,6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(β1,6 N-aeetylglucosaminyltransferase,GnT-V)在糖基化修饰中的作用 | 第15-17页 |
| 2 糖基化与肝纤维化的关系 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-21页 |
| 实验部分 | 第21-47页 |
| 一、引言 | 第21页 |
| 二、实验仪器和材料 | 第21-23页 |
| 1 实验仪器 | 第21页 |
| 2 实验材料 | 第21-23页 |
| 三、实验方法 | 第23-29页 |
| 1 TAA诱导的小鼠肝纤维化模型 | 第23-24页 |
| 2 重组腺病毒载体的构建 | 第24页 |
| 3 细胞流式分析 | 第24页 |
| 4 HSC-T6增殖速度检测 | 第24页 |
| 5 细胞侵袭实验 | 第24-25页 |
| 6 细胞划痕实验 | 第25页 |
| 7 肝脏羟脯氨酸含量及血清转氨酶活性的测定 | 第25页 |
| 8 肝脏组织HE染色、天狼星红染色、免疫组化及免疫荧光染色 | 第25-27页 |
| ·组织的包埋与切片 | 第25页 |
| ·组织切片的HE染色 | 第25-26页 |
| ·组织切片的天狼星红染色 | 第26页 |
| ·组织切片的免疫组织化学染色 | 第26页 |
| ·组织切片的免疫荧光染色 | 第26-27页 |
| 9 Western-blot | 第27-28页 |
| ·细胞蛋白提取 | 第27页 |
| ·组织蛋白提取 | 第27页 |
| ·制胶 | 第27页 |
| ·转膜(湿法) | 第27页 |
| ·免疫标记及显影 | 第27-28页 |
| 10 免疫共沉淀 | 第28页 |
| 11 RNA提取及Q-PCR | 第28-29页 |
| ·细胞RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·组织RNA的提取 | 第29页 |
| ·逆转录体系(20μL)TaKaRa试剂盒 | 第29页 |
| ·Q-PCR体系(20μL)TaKaRa试剂盒 | 第29页 |
| 四、实验结果 | 第29-44页 |
| 1 GnT-V表达水平在肝纤维化发生过程中的变化 | 第29-30页 |
| 2 构建能高效表达GnT-V shRNA的重组腺病毒 | 第30-32页 |
| 3 下调GnT-V表达水平对肝星状细胞活化程度的影响 | 第32-34页 |
| 4 下调小鼠肝组织GnT-V表达能有效抑制肝纤维化发生 | 第34-37页 |
| 5 HSC细胞GnT-V表达水平对TGF β受体N-型糖基化修饰和TGF-β／Smad信号通路的影响 | 第37-39页 |
| 6 下调GnT-V表达对PDGF诱导的肝星状细胞增殖和迁移及PDGF/Erk信号通路的作用 | 第39-41页 |
| 7 GnT-V调控肝细胞上皮间质转化(EMT)的作用研究 | 第41-44页 |
| 五、小结及讨论 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
