致谢 | 第1-4页 |
摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-27页 |
1 石蒜属植物的研究进展 | 第12-13页 |
·核型分析 | 第12页 |
·分子系统学 | 第12-13页 |
·组织培养 | 第13页 |
2 组织培养的研究进展 | 第13-24页 |
·组织培养(离体培养)的概念 | 第13-17页 |
·分生组织或顶芽(茎尖)培养 | 第16-17页 |
·薄层培养 | 第17页 |
·体细胞胚胎发生途径 | 第17页 |
·离体培养器官发生的调控机制 | 第17-19页 |
·离体培养过程中的发育事件 | 第18页 |
·离体培养中腋芽的起源及参与其发生的基因 | 第18-19页 |
·KNOX 基因与茎尖分生组织发育 | 第19-24页 |
·KNOX I 编码的蛋白质结构 | 第19页 |
·茎尖分生组织的结构 | 第19-24页 |
3 主要技术方法 | 第24-26页 |
·植物基因克隆的主要方法 | 第24-25页 |
·植物基因表达的检测、分析方法 | 第25-26页 |
·荧光定量 PCR | 第25-26页 |
·原位杂交技术 | 第26页 |
4 本课题的研究目的、意义 | 第26-27页 |
第二章 中国石蒜离体培养体系的建立及植株再生的组织学研究 | 第27-35页 |
1 材料与方法 | 第27-30页 |
·材料 | 第27页 |
·外植体的制备 | 第27页 |
·培养基成分 | 第27页 |
·离体培养过程 | 第27-29页 |
·诱导腋芽发生 | 第28页 |
·腋芽增殖 | 第28页 |
·再生球茎生根 | 第28-29页 |
·培养条件 | 第29页 |
·统计指标及分析方法 | 第29页 |
·植株再生的形态和组织学观察 | 第29-30页 |
·形态学观察 | 第29页 |
·组织学观察 | 第29-30页 |
2 结果与分析 | 第30-31页 |
·5种处理对诱导腋芽再生的效果 | 第30页 |
·植株再生的形态学阶段划分及腋芽发生的组织学观察 | 第30-31页 |
3 讨论 | 第31-35页 |
·中国石蒜离体培养的形态发生过程 | 第31-32页 |
·腋芽再生过程中的发育学事件 | 第32-35页 |
第三章 中国石蒜离体培养过程中的体细胞无性系变异研究 | 第35-42页 |
1 材料与方法 | 第35-37页 |
·材料 | 第35-36页 |
·方法 | 第36-37页 |
·基因组 DNA 提取 | 第36页 |
·ISSR 和 SRAP 体系的建立 | 第36页 |
·扩增产物的检测 | 第36页 |
·数据统计及分析 | 第36-37页 |
2 结果与分析 | 第37页 |
·ISSR 标记分析 | 第37页 |
·SRAP 标记分析 | 第37页 |
·遗传相似性和聚类分析 | 第37页 |
3 讨论 | 第37-42页 |
第四章 中国石蒜离体培养过程中 3 种同工酶分析 | 第42-46页 |
1 材料与方法 | 第42-43页 |
·材料 | 第42页 |
·药品和试剂 | 第42页 |
·酶液制备 | 第42页 |
·制胶及电泳条件 | 第42-43页 |
·凝胶染色 | 第43页 |
2 结果与分析 | 第43页 |
3 讨论 | 第43-46页 |
第五章 中国石蒜离体培养过程中 4 种内源激素的动态变化规律 | 第46-59页 |
1 材料与方法 | 第46-47页 |
·材料 | 第46页 |
·方法 | 第46-47页 |
2 结果与分析 | 第47-52页 |
·初始材料的内源激素水平 | 第47页 |
·快反应阶段内源激素的变化规律 | 第47-48页 |
·CKs 和 IAA 在快反应阶段的变化规律 | 第47页 |
·ABA 和 GAs 在快反应阶段的变化规律 | 第47-48页 |
·慢反应阶段内源激素的变化规律 | 第48-52页 |
·CKs 和 IAA 在慢反应阶段的变化规律 | 第48页 |
·ABA 和 GAs 在慢反应阶段的变化规律 | 第48-52页 |
3 讨论 | 第52-59页 |
·鳞茎再生过程中的发育事件 | 第53-54页 |
·鳞茎所处的生理状态及 4 种内源激素在离体培养过程中的作用 | 第54-56页 |
·ABA 和 GAs 的作用 | 第55页 |
·IAA 与 CKs 的作用 | 第55-56页 |
·激素的作用机制 | 第56-59页 |
·调控细胞分裂周期 | 第56-57页 |
·生长素极性运输 | 第57-59页 |
第六章 多糖、多淀粉植物 RNA 提取方法的比较及在石蒜属植物中的建立 | 第59-72页 |
1 材料与方法 | 第59-64页 |
·材料 | 第59-60页 |
·溶液与试剂 | 第60页 |
·操作步骤 | 第60-62页 |
·RNA 质量检测 | 第62-63页 |
·总 RNA 中 DNA 消化 | 第63页 |
·cDNA 合成及质量检测 | 第63-64页 |
2 结果与分析 | 第64-67页 |
·9种提取方法的效果比较 | 第64-65页 |
·改良方法在石蒜属 5 种植物上的有效性检测 | 第65-67页 |
·内参基因 Actin 的电泳检测 | 第67页 |
3 讨论 | 第67-72页 |
·RNA 提取方法的比较及裂解液主要成分的作用 | 第67页 |
·本方法的特点 | 第67-72页 |
第七章 中国石蒜 KNOX 基因的同源克隆和序列分析 | 第72-87页 |
1 材料 | 第72-73页 |
·植物材料 | 第72页 |
·菌株与载体 | 第72页 |
·试剂与试剂盒 | 第72页 |
·缓冲液、试剂和培养基 | 第72页 |
·仪器设备 | 第72-73页 |
2 实验内容与方法 | 第73-80页 |
·中国石蒜鳞叶总 RNA 提取、检测及定量 | 第73-74页 |
·总 RNA 提取 | 第73页 |
·总 RNA 质量检测 | 第73页 |
·DNaseⅠ处理纯化总 RNA | 第73-74页 |
·RNA 质量复检 | 第74页 |
·第一链 cDNA 合成 | 第74页 |
·引物设计与实验思路 | 第74-80页 |
·3′RACE 巢式 PCR | 第75页 |
·3′RACEcDNA 制备 | 第75页 |
·3′RACE 巢式扩增 | 第75-76页 |
·目的片段的回收和纯化 | 第76页 |
·片段与载体的连接 | 第76页 |
·连接产物的转化 | 第76-77页 |
·5′RACE 巢式 PCR | 第77-80页 |
·中国石蒜 KNOX 基因 cDNA 全长的获得 | 第80页 |
·序列分析 | 第80页 |
3 结果与分析 | 第80-87页 |
·RNA 质量 | 第80页 |
·中国石蒜 KNOX 基因的同源克隆 | 第80-84页 |
·中国石蒜 KNOX 基因序列分析 | 第84-85页 |
·LcKNOX1 基因的聚类分析 | 第85-87页 |
第八章 离体培养过程中中国石蒜 KNOX 基因的实时定量表达分析 | 第87-104页 |
1 材料与方法 | 第88-91页 |
·材料 | 第88页 |
·方法 | 第88-91页 |
·各时期 RNA 提取 | 第88页 |
·cDNA 合成 | 第88页 |
·实时定量 PCR | 第88-91页 |
·操作平台及分析软件 | 第91页 |
2 结果与分析 | 第91-102页 |
·RNA 质量 | 第91-92页 |
·引物筛选 | 第92-94页 |
·目标基因的扩增效率 | 第94-95页 |
·内参基因的选择 | 第95-98页 |
·LcKNOX1 基因在不同发育阶段的表达 | 第98-102页 |
3 讨论 | 第102-104页 |
·荧光定量 PCR 程序的优化 | 第102页 |
·内参基因的选择 | 第102-103页 |
·KNOX 基因的表达 | 第103页 |
·改进离体培养的建议 | 第103-104页 |
第九章 全文总结与展望 | 第104-106页 |
1.本研究的主要结论 | 第104页 |
2.主要创新点 | 第104页 |
3.问题与展望 | 第104-106页 |
参考文献 | 第106-119页 |
攻读博士期间已发表的论文 | 第119-120页 |
摘要 | 第120-123页 |
Abstract | 第123-125页 |