| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 课题综述及研究意义 | 第9-25页 |
| ·散发性结直肠癌研究进展 | 第9-10页 |
| ·候选基因及其功能 | 第10-11页 |
| ·KRAS基因 | 第10页 |
| ·PDCD4基因 | 第10-11页 |
| ·MCC基因 | 第11页 |
| ·微小RNA(miRNA) | 第11-18页 |
| ·miRNA的研究进展 | 第11页 |
| ·miRNA的基本特征 | 第11-12页 |
| ·miRNA的功能 | 第12页 |
| ·miRNA的生成及加工机制 | 第12-14页 |
| ·miRNA与恶性肿瘤的关系 | 第14-18页 |
| ·候选基因miRNA的鉴定 | 第18-21页 |
| ·miRNA鉴定的发展 | 第18-19页 |
| ·miRNA鉴定的方法 | 第19页 |
| ·生物信息学法鉴定miRNAs | 第19-21页 |
| ·双荧光素酶报告基因法鉴定miRNA | 第21页 |
| ·本实验研究的内容和意义 | 第21-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-41页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·载体、菌株、细胞系 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法及步骤 | 第28-41页 |
| ·散发性结直肠癌候选基因的选择与miRNAs的筛选 | 第28页 |
| ·野生型T克隆重组质粒的构建 | 第28-33页 |
| ·目的SNPs位点进行定点突变,构建突变型T克隆载体 | 第33-34页 |
| ·候选基因野生型及突变型重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·无内毒素质粒提取 | 第35-37页 |
| ·Hela细胞的培养 | 第37页 |
| ·细胞转染 | 第37-38页 |
| ·双荧光素酶活力检测 | 第38-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-53页 |
| ·散发性结直肠癌候选基因与靶miRNAs的确定 | 第41-43页 |
| ·候选基因与相关SNPs | 第41页 |
| ·候选基因靶miRNAs的确定 | 第41-43页 |
| ·构建野生型T克隆重组质粒 | 第43-45页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·目标片段PCR扩增验证 | 第43-44页 |
| ·野生型T克隆重组质粒双酶切鉴定结果 | 第44页 |
| ·野生型T克隆重组质粒测序结果 | 第44-45页 |
| ·突变型T克隆载体构建 | 第45-47页 |
| ·突变引物设计 | 第45页 |
| ·突变型T克隆重组质粒双酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·突变型T克隆重组质粒测序结果 | 第46-47页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组表达载体的双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·野生型与突变型重组表达载体测序结果 | 第47-48页 |
| ·细胞实验结果 | 第48-53页 |
| ·荧光表达情况 | 第49-51页 |
| ·双荧光素酶检测结果 | 第51-53页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |