| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语 | 第12-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-30页 |
| 1 凝集素的概论 | 第17-25页 |
| ·凝集素的分类 | 第17-20页 |
| ·凝集素的生物特性 | 第20-23页 |
| ·凝集素凝集特性 | 第20-21页 |
| ·凝集素诱导肿瘤细胞产生凋亡和自噬 | 第21-22页 |
| ·凝集素的抗病毒特性 | 第22页 |
| ·凝集素的其他特性 | 第22-23页 |
| ·凝集素的应用 | 第23-25页 |
| ·凝集素在基础研究领域的应用 | 第23-24页 |
| ·凝集素在肿瘤领域的应用 | 第24页 |
| ·凝集素在转基因植物领域的应用 | 第24-25页 |
| 2 毕赤酵母表达系统概论 | 第25-28页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优势 | 第25页 |
| ·毕赤酵母表达的载体和菌株 | 第25-27页 |
| ·毕赤酵母表达质粒的一般特征 | 第26页 |
| ·毕赤酵母表达菌株 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母外源基因表达优化策略 | 第27-28页 |
| ·载体改造以及外源基因优化策略 | 第27页 |
| ·菌株选择以及培养条件优化策略 | 第27-28页 |
| 3 人源 SUMO 融合系统促蛋白可溶表达 | 第28-29页 |
| ·融合表达系统的简述 | 第28页 |
| ·SUMO 融合表达系统 | 第28-29页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 人源 SUMO 促半夏凝集素的表达纯化及活性初步研究 | 第30-53页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 1 实验材料和方法 | 第31-44页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-44页 |
| ·载体 pET-32-SUMO-P-D2 的构建与鉴定 | 第31-37页 |
| ·pEasyT1-pta 质粒以及 pET-32-SUMO 质粒的提取 | 第31-32页 |
| ·三叶半夏凝集 C 端结构域基因序列的获取 | 第32-34页 |
| ·pET-32-SUMO-P-D2 载体转化及阳性克隆筛选、鉴定 | 第34-37页 |
| ·BL21(DE3)表达菌株的构建以及表达 | 第37-39页 |
| ·SUMO 融合系统表达的蛋白 SUMO-D2 的分离纯化 | 第39页 |
| ·SUMO 酶酶切蛋白 SUMO-D2 以及蛋白 P-D2 的分离纯化 | 第39-41页 |
| ·P-D2 蛋白凝血活性实验以及糖结合特异性实验 | 第41-42页 |
| ·MTT 法检测 P-D2 蛋白的抗肿瘤活性 | 第42-43页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察肿瘤细胞凋亡现象 | 第43-44页 |
| 2 实验结果 | 第44-50页 |
| ·三叶半夏凝集素 C 端结构域基因序列的获得 | 第44页 |
| ·载体 pET-32-SUMO-P-D2 的鉴定 | 第44-45页 |
| ·SUMO-D2 融合蛋白表达以及分离纯化 | 第45-46页 |
| ·SUMO-D2 融合蛋白酶切以及 P-D2 分离纯化 | 第46-47页 |
| ·P-D2 蛋白凝血活性实验以及糖结合特异性实验 | 第47-48页 |
| ·P-D2 蛋白体外抗肿瘤活性实验 | 第48-49页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察肿瘤细胞凋亡现象 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 毕赤酵母表达三叶半夏凝集素及其活性研究 | 第53-72页 |
| 前言 | 第53页 |
| 1.材料与方法 | 第53-63页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-63页 |
| ·载体 pPIC9k-P-D1 的构建与鉴定 | 第54-58页 |
| ·pEasyT1-pta 质粒以及 pPIC9k 质粒的提取 | 第54页 |
| ·三叶半夏凝集 N 端结构域基因序列的获取 | 第54-55页 |
| ·pPIC9k-P-D1 载体的转化及阳性克隆的筛选、鉴定 | 第55-58页 |
| ·阳性 SMD1168 菌株的构建以及筛选 | 第58页 |
| ·SMD1168 菌株的分离鉴定 | 第58页 |
| ·SMD1168 菌株感受态的制备 | 第58页 |
| ·pPIC9k-P-D1 载体电转进入到 SMD1168 菌株 | 第58-59页 |
| ·pPIC9k-P-D1 质粒的线性化 | 第58-59页 |
| ·电转操作步骤 | 第59页 |
| ·SMD1168 菌株转化子的筛选与鉴定 | 第59-61页 |
| ·阳性 SMD1168 菌株的诱导表达鉴定 | 第61页 |
| ·三叶半夏凝集素 N 端结构域的表达纯化 | 第61-62页 |
| ·天然三叶半夏凝集素的提取 | 第62-63页 |
| ·P-D1 蛋白的凝血活性以及糖结合特异性实验 | 第63页 |
| ·P-D1 抗真菌活性实验 | 第63页 |
| ·P-D1 体外抗肿瘤活性实验 | 第63页 |
| ·P-D1 诱导 Bel-7404 细胞凋亡现象观察实验 | 第63页 |
| 2 实验结果 | 第63-70页 |
| ·载体 pPIC9k-P-D1 的构建与鉴定 | 第63-64页 |
| ·阳性 SMD1168 菌株的鉴定与表达纯化 | 第64-67页 |
| ·P-D1 蛋白的凝血活性以及糖特异性实验 | 第67页 |
| ·重组蛋白 P-D1 抗真菌活性实验 | 第67-68页 |
| ·P-D1 体外抗肿瘤活性实验 | 第68-69页 |
| ·P-D1 诱导 Bel-7404 细胞凋亡现象观察实验 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-71页 |
| 4 本章小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 硕士期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
