| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 黄瓜苦味物质生物合成研究进展 | 第11-12页 |
| 2 转录因子的结构与功能 | 第12-14页 |
| ·DNA结合区 | 第13页 |
| ·转录调控区 | 第13页 |
| ·核定位信号区 | 第13-14页 |
| ·寡聚化位点 | 第14页 |
| 3 酵母单杂交系统 | 第14-16页 |
| ·酵母单杂交原理 | 第14-15页 |
| ·酵母单杂交在植物基因工程中的应用 | 第15-16页 |
| 4 植物次生代谢物转录调控的研究进展 | 第16-20页 |
| ·MYB类转录因子 | 第17-18页 |
| ·bHLH类转录因子 | 第18-19页 |
| ·AP2/ERF类转录因子 | 第19页 |
| ·WRKY类转录因子 | 第19-20页 |
| ·NAC类转录因子 | 第20页 |
| 5 本研究目的与意义及技术路线 | 第20-23页 |
| ·本研究目的与意义 | 第20-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 酵母单杂交报告载体pHIS2-BPr的构建 | 第23-31页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·植株总DNA的提取 | 第24页 |
| ·Bi基因启动子区的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·目的片段的回收 | 第25页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第25-26页 |
| ·质粒提取 | 第26页 |
| ·报告载体pHIS2-BPr的构建 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第27页 |
| ·摸索最适3-AT浓度 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-30页 |
| ·报告载体pHIS2-BPr的构建 | 第28-29页 |
| ·摸索最适的3-AT浓度 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 与pHIS2-BPr互作的转录因子筛选与鉴定 | 第31-45页 |
| 1 材料与方法 | 第31-36页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| ·黄瓜cDNA文库的扩增与检测 | 第31-32页 |
| ·酵母单杂交对照试验 | 第32-33页 |
| ·与pHIS2-BPr互作的转录因子筛选 | 第33页 |
| ·与pHIS2-BPr互作的转录因子分析 | 第33-34页 |
| ·与pHIS2-BPr互作的转录因子恢复验证 | 第34-35页 |
| ·黄瓜总RNA的提取与cDNA第一条的合成 | 第35页 |
| ·与pHIS2-BPr互作的转录因子构建全长验证 | 第35页 |
| ·pHIS2-p450报告载体的构建 | 第35-36页 |
| ·互作蛋白结合顺式作用元件的分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-43页 |
| ·cDNA文库的检测 | 第36页 |
| ·对照试验 | 第36-37页 |
| ·与pHIS2-BPr互作的转录因子 | 第37页 |
| ·pHIS2-p450报告载体的构建 | 第37-38页 |
| ·调控cluster的候选转录因子的构建与验证 | 第38-41页 |
| ·互作蛋白结合顺式作用元件的确定 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 候选转录因子瞬时表达分析 | 第45-55页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·pCAMBIA1300-Luc报告载体的构建 | 第46-47页 |
| ·pCAMBIA1300-TF效应载体的构建 | 第47-48页 |
| ·农杆菌的转化 | 第48页 |
| ·烟草注射实验 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-53页 |
| ·pCAMBIA1300-Luc报告载体的构建 | 第49页 |
| ·pCAMBIA1300-TF效应载体的构建 | 第49-50页 |
| ·pCAMBIA1300-Luc和pCAMBIA1300-TF的农杆菌转化 | 第50-51页 |
| ·烟草注射实验 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 Csa5G220基因原核表达分析 | 第55-61页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·原核表达载体pET32a-Csa5G220的构建 | 第56页 |
| ·His-Tag融合蛋白的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·His-Tag融合蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-59页 |
| ·原核表达载体pET32a-Csa5G220的构建 | 第58页 |
| ·Csa5G220-His融合蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| ·Csa5G220-His融合蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 全文结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
