| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-30页 |
| ·内质网应激 | 第13-14页 |
| ·IRE1α—最保守的UPR感受器 | 第14-16页 |
| ·IRE1α-XBP1与疾病 | 第16-23页 |
| ·IRE1α-XBP1与肿瘤 | 第16-21页 |
| ·IRE1α-XBP1与代谢疾病 | 第21页 |
| ·IRE1α-XBP1其他一些相关疾病 | 第21-23页 |
| ·IRE1-XBP1通路调节剂的研究现状 | 第23-25页 |
| ·IRE1α-XBP1抑制剂 | 第23-24页 |
| ·IRE1α-XBP1激活剂 | 第24-25页 |
| ·内质网与氧化应激 | 第25-27页 |
| ·IRE1α-XBP1反应内质网应激状态 | 第27-28页 |
| ·论文研究目的与总体设计 | 第28-30页 |
| 第二章 基于IRE1α-XBP1通路调节剂的筛选以及小分子化合物21#和17#的发现 | 第30-44页 |
| 1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-37页 |
| ·IRE1α核酸酶底物的设计 | 第32-33页 |
| ·IRE1α核酸酶活性测定体系及注意事项 | 第33-34页 |
| ·细胞培养 | 第34页 |
| ·细胞水平化合物筛选步骤 | 第34-35页 |
| ·RNase A测活体系 | 第35页 |
| ·Luciferase酶活测定 | 第35页 |
| ·RT-PCR | 第35-37页 |
| ·实时荧光定量PCR(Q-PCR) | 第37页 |
| ·数据处理与系统指标 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-42页 |
| ·细胞水平筛选获得28个UPR小分子调节剂 | 第37-38页 |
| ·初筛 | 第37-38页 |
| ·复筛 | 第38页 |
| ·评价候选化合物分子水平对IRE1α核酸酶活性及细胞水平对XBP1剪切的影响 | 第38-41页 |
| ·候选化合物分子水平对IRE1α核酸酶活性的影响 | 第38-40页 |
| ·RT-PCR评价候选化合物在细胞水平对XBP1剪切的影响 | 第40-41页 |
| ·分子和细胞水平考察化合物作用的选择性 | 第41-42页 |
| ·IRE1α核酸酶抑制剂对RNase A活性的影响 | 第41页 |
| ·细胞水平评价28个有效化合物对IRE1α-XBP1通路影响的选择性 | 第41-42页 |
| 4 讨论与总结 | 第42-44页 |
| 第三章 21#抑制IRE1α核酸酶活性的作用机制研究 | 第44-59页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-47页 |
| ·IRE1α激酶分子测活方法(HTRF)介绍 | 第44-45页 |
| ·激酶测活体系 | 第45-46页 |
| ·IRE1α核酸酶活性测定 | 第46页 |
| ·ROS检测 | 第46页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·RT-PCR和western blot | 第46-47页 |
| ·数据处理与系统指标 | 第47页 |
| 3 实验结果 | 第47-56页 |
| ·星形孢菌素(STS)对IRE1α激酶活性的影响 | 第47页 |
| ·细胞水平21#对IRE1α酶活性的影响 | 第47-48页 |
| ·分子水平21#对IRE1α激酶活性的影响 | 第48-49页 |
| ·21#对IRE1α酶活性的抑制与孵育时间的关系 | 第49-50页 |
| ·DTT不同浓度对21#发挥酶活抑制作用的影响 | 第50-52页 |
| ·检测DTT与21#反应是否产生活性氧(ROS) | 第52-53页 |
| ·检测ROS部分清除后21#对IRE1α核酸酶活性的影响 | 第53-54页 |
| ·H_2O_2和zhang400-1对IRE1α酶活性的影响 | 第54-56页 |
| ·质谱鉴定IRE1α可被氧化的保守半胱氨酸位点 | 第56页 |
| 4 讨论与总结 | 第56-59页 |
| 第四章 IRE1α-XBP1非选择性抑制剂17#及其改造系列化合物的抗肿瘤活性与作用机制研究 | 第59-71页 |
| 1 实验材料 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-62页 |
| ·RT-PCR,western blot,Q-PCR | 第60-61页 |
| ·MTS法检测细胞活率 | 第61页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期 | 第61-62页 |
| ·数据处理与系统指标 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-69页 |
| ·17#对UPR下游因子转录水平的影响 | 第62-64页 |
| ·17#与2-DG共同作用抑制肿瘤细胞生长 | 第64-65页 |
| ·17#与2-DG共同作用引起细胞周期阻滞 | 第65-66页 |
| ·17#与2-DG的共同作用效应与UPR相关 | 第66-67页 |
| ·17#及其改造化合物的相关评价 | 第67-69页 |
| 4 总结及待解决的问题 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 缩略语检索表 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
