| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-16页 |
| 第一节 血蓝蛋白简介 | 第9-11页 |
| ·动物呼吸蛋白概述 | 第9页 |
| ·血蓝蛋白 | 第9-11页 |
| ·节肢动物的血蓝蛋白 | 第9-10页 |
| ·软体动物的血蓝蛋白 | 第10-11页 |
| 第二节 血蓝蛋白的生物功能 | 第11-13页 |
| ·血蓝蛋白的载氧功能 | 第11-12页 |
| ·血蓝蛋白的酚氧化酶活性 | 第12-13页 |
| ·酚氧化酶简介 | 第12页 |
| ·血蓝蛋白与酚氧化酶 | 第12页 |
| ·血蓝蛋白的激活与抑制作用 | 第12-13页 |
| ·血蓝蛋白的其他功能 | 第13页 |
| 第三节 本论文研究背景及设计思路 | 第13-16页 |
| ·论文的研究意义 | 第13-14页 |
| ·国内外研究现状 | 第14页 |
| ·论文的研究内容 | 第14-15页 |
| ·实验的技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 钉螺血蓝蛋白功能域基因的筛选及克隆 | 第16-31页 |
| 第一节 实验材料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·实验菌株 | 第16页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第16-17页 |
| 第二节 实验方法 | 第17-24页 |
| ·钉螺血蓝蛋白总 RNA 提取 | 第17-18页 |
| ·实验准备工作 | 第17页 |
| ·实验过程 | 第17-18页 |
| ·RNA 电泳 | 第18页 |
| ·钉螺 cDNA 的制备—逆转录反应 | 第18-19页 |
| ·钉螺血蓝蛋白完整功能域的筛选 | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·PCR 扩增钉螺血蓝蛋白 | 第19页 |
| ·DNA 电泳检验 PCR 结果 | 第19-20页 |
| ·凝胶回收 PCR 产物 | 第20页 |
| ·测序及完整功能域的筛选 | 第20页 |
| ·目的基因的 T-A 克隆 | 第20-24页 |
| ·基因特异性引物设计 | 第20-21页 |
| ·P 功能域基因的扩增 | 第21页 |
| ·T-A 克隆 | 第21-24页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第24-30页 |
| ·钉螺总 RNA 提取 | 第24-25页 |
| ·筛选钉螺血蓝蛋白完整功能域 | 第25-28页 |
| ·钉螺血蓝蛋白基因的获取及序列测定 | 第25页 |
| ·获取一条完整功能域 | 第25-28页 |
| ·目的基因的 T-A 克隆 | 第28-30页 |
| ·特异引物扩增目的基因的 PCR 电泳结果 | 第29页 |
| ·T-A 克隆结果验证 | 第29-30页 |
| 本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 钉螺血蓝蛋白 P 功能域基因在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第31-42页 |
| 第一节 实验材料 | 第31-33页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第31页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第31-33页 |
| 第二节 实验方法 | 第33-38页 |
| ·钉螺血蓝蛋白 P 功能域基因重组质粒的构建 | 第33-36页 |
| ·构建到 pET28a 载体 | 第33-34页 |
| ·构建到 pMCSG9 载体 | 第34-36页 |
| ·重组质粒 OhHP -pET28a、OhHP- pMCSG9 在大肠杆菌（BL21）中的表达 | 第36-38页 |
| ·重组质粒 OhHP -pET28a、OhHP- pMCSG9 转化到 BL21 | 第36页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白表达情况 | 第37-38页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第38-41页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定结果 | 第38-40页 |
| ·构建到 pET28a 载体 | 第38-39页 |
| ·构建到 pMCSG9 载体 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的表达 | 第40-41页 |
| ·OhHP -pET28a 在大肠杆菌中的表达结果 | 第40-41页 |
| ·OhHP- pMCSG9 在大肠杆菌中的表达结果 | 第41页 |
| 本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 钉螺血蓝蛋白 P 功能域蛋白的纯化与晶体生长 | 第42-50页 |
| 第一节 实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·溶液及培养基的配制配制 | 第43页 |
| 第二节 实验方法 | 第43-45页 |
| ·OhHP -pET28a 蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的大量表达与样品制备 | 第43-44页 |
| ·FPLC Ni2+亲和层析预装柱纯化 | 第44页 |
| ·FPLC DEAE 预装柱二次纯化 | 第44页 |
| ·OhHP-pET28a 蛋白晶体的生长 | 第44-45页 |
| ·蛋白含量测定及浓缩 | 第44-45页 |
| ·蛋白结晶条件的筛选 | 第45页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第45-49页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第45-47页 |
| ·蛋白的大量表达及溶解性质 | 第45-46页 |
| ·Ni~(2+)亲和层析 | 第46页 |
| ·DEAE 纯化结果 | 第46-47页 |
| ·蛋白结晶 | 第47-48页 |
| ·晶体 X 射线衍射数据收集及简单分析 | 第48-49页 |
| 本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
