| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·共生固氮的概念及意义 | 第10-11页 |
| ·豆科植物与根瘤菌根瘤共生固氮体系 | 第11-12页 |
| ·根瘤菌和豆科植物 | 第11页 |
| ·根瘤的形成 | 第11-12页 |
| ·根瘤菌中参与的结瘤基因 | 第12页 |
| ·结瘤因子 | 第12-13页 |
| ·豆科植物信号转导途径 | 第13-15页 |
| ·百脉根结瘤因子受体蛋白激酶 | 第15-16页 |
| ·小G蛋白 | 第16-17页 |
| ·网格重链蛋白 | 第17-18页 |
| ·网格蛋白介导的胞吞作用机制 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第19-20页 |
| ·双分子荧光互补技术(BiFC) | 第20-21页 |
| ·本实验的研究目的、内容和实验技术路线 | 第21-22页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第22-44页 |
| ·材料 | 第22-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·PCR引物和测序 | 第24页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第24-28页 |
| ·酵母双杂交系统试剂 | 第24-25页 |
| ·β-半乳糖苷酶检测试剂 | 第25页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第25-26页 |
| ·DNA琼脂糖电泳试剂 | 第26页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第26-27页 |
| ·Western Blot试剂 | 第27-28页 |
| ·抽提烟草表达蛋白试剂 | 第28页 |
| ·其他相关化学试剂 | 第28页 |
| ·主要分子生物学试剂及仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-44页 |
| ·基本分子生物学方法 | 第29-30页 |
| ·DNA体外重组法 | 第29页 |
| ·DNA其它操作方法 | 第29-30页 |
| ·植物材料的预处理 | 第30页 |
| ·总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR反应 | 第31-32页 |
| ·反转录反应 | 第31-32页 |
| ·PCR反应 | 第32页 |
| ·CHCR基因的分离鉴定和诱饵质粒的构建及检测 | 第32-34页 |
| ·CHCR基因的鉴定分离 | 第32页 |
| ·CHCR诱饵载体的构建 | 第32-33页 |
| ·CHCR缺失突变体在pGADT7上的融合 | 第33页 |
| ·诱饵蛋白转录激活活性和毒性的检测 | 第33页 |
| ·酵母质粒的转化 | 第33-34页 |
| ·酵母AD-cDNA文库的筛选和阳性克隆的鉴定 | 第34-37页 |
| ·酵母文库的初步筛选 | 第34-35页 |
| ·复筛 | 第35页 |
| ·酵母质粒的抽提 | 第35-36页 |
| ·文库质粒的分离和鉴定 | 第36-37页 |
| ·小范围mating | 第37页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第37-38页 |
| ·蛋白质纯化 | 第38-41页 |
| ·靶蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白包涵体纯化 | 第40页 |
| ·抗体制备 | 第40-41页 |
| ·Western Blotting | 第41-42页 |
| ·双分子荧光互补技术(BiFC)的应用和分析 | 第42-44页 |
| ·BiFC载体的构建 | 第42页 |
| ·蛋白烟草叶片的表达 | 第42-43页 |
| ·蛋白烟草叶片表达的目标蛋白的抽提 | 第43-44页 |
| 3. 结果与分析 | 第44-53页 |
| ·百脉根网格重链蛋白CHCR的分离和鉴定 | 第44-45页 |
| ·网格重链蛋白的生物信息学分析 | 第45-47页 |
| ·网格蛋白基因组分析 | 第45-46页 |
| ·网格重链蛋白的生物进化分析 | 第46-47页 |
| ·CHCR蛋白的结构分析 | 第47页 |
| ·CHCR与ROP6蛋白的相互作用 | 第47-50页 |
| ·CHCR与ROP6蛋白的体内相互作用 | 第47-48页 |
| ·CHCR与ROP6蛋白的体外相互作用 | 第48-49页 |
| ·CHCR与ROP6的双分子荧光互补技术(BiFC)的验证 | 第49-50页 |
| ·CHCR与ROP6相互作用结构域探索 | 第50-52页 |
| ·CHCR筛选百脉根cDNA文库 | 第52-53页 |
| 4 总结与讨论 | 第53-55页 |
| ·总结 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录一 | 第60-61页 |
| 附录二 | 第61-62页 |
| 附录三 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |