| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型及其疫苗的研究进展 | 第15-37页 |
| 1 猪圆环病毒的分子生物学特性 | 第15-22页 |
| ·病毒的分类地位 | 第15-16页 |
| ·病毒的形态学及理化特性 | 第16-17页 |
| ·基因组结构及编码蛋白 | 第17-21页 |
| ·相关的表位研究 | 第21-22页 |
| 2 猪圆环病毒病的诊断方法研究 | 第22-25页 |
| ·病原学方法 | 第22-24页 |
| ·血清学方法 | 第24-25页 |
| 3 猪圆环病毒二型疫苗研究进展 | 第25-31页 |
| ·灭活疫苗 | 第26页 |
| ·弱毒疫苗 | 第26页 |
| ·活载体疫苗 | 第26-27页 |
| ·亚单位疫苗 | 第27页 |
| ·DNA疫苗 | 第27-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 研究内容 | 第37-103页 |
| 第二章 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体5H7 B细胞表位的鉴定 | 第37-51页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·毒株、质粒及其他材料 | 第38页 |
| ·Cap蛋白基因分段克隆引物设计及合成 | 第38-39页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第41页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| ·目的蛋白的Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| ·Western blot鉴定Cap蛋白B细胞表位 | 第42页 |
| ·Cap蛋白抗原表位的变异分析 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-47页 |
| ·CapF/G/H/I基因片段的扩增 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-32a-CapE/F/G/H的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的表达及鉴定 | 第45-46页 |
| ·Western blotting方法鉴定Cap蛋白B细胞表位 | 第46页 |
| ·Cap B细胞表位保守性分析 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| ABSTRACT | 第50-51页 |
| 第三章 猪圆环病毒2型单抗阻断ELISA抗体检测方法的建立和应用 | 第51-71页 |
| 摘要 | 第51-52页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| ·试剂、菌株、细胞及血清 | 第52页 |
| ·抗原蛋白的表达与纯化 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的纯化及辣根过氧化酶(HRP)标记 | 第53-54页 |
| ·阻断ELISA术式 | 第54页 |
| ·阻断ELISA最佳反应条件的选择 | 第54-55页 |
| ·阻断ELISA临界值的确定 | 第55-56页 |
| ·阻断ELISA的敏感性试验 | 第56页 |
| ·阻断ELISA特异性试验 | 第56页 |
| ·阻断ELISA的重复性试验 | 第56页 |
| ·符合率的测定 | 第56页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-68页 |
| ·抗原蛋白的表达优化及纯化结果 | 第56-60页 |
| ·单克隆抗体的纯化和HRP标记 | 第60-61页 |
| ·阻断ELISA最佳反应条件的选择 | 第61-65页 |
| ·阻断ELISA临界值的确定 | 第65-66页 |
| ·阻断ELISA的敏感性 | 第66页 |
| ·阻断ELISA的特异性 | 第66页 |
| ·阻断ELISA的重复性 | 第66-67页 |
| ·阻断ELISA的符合率 | 第67页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| ABSTRACT | 第70-71页 |
| 第四章 PCV2 ORF2基因修饰及其真核表达质粒的构建与鉴定 | 第71-83页 |
| 摘要 | 第71-72页 |
| 1 材料 | 第72页 |
| ·质粒、菌株与细胞 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-77页 |
| ·PCV2 ORF2基因修饰设计思路 | 第72-73页 |
| ·PCV2 ORF2基因的扩增 | 第73页 |
| ·修饰的ORF2基因的获得 | 第73-74页 |
| ·重组真核质粒的构建 | 第74-76页 |
| ·重组质粒的真核表达鉴定 | 第76-77页 |
| 3 结果 | 第77-79页 |
| ·Cap、SynCap、SynCap(m)及SynCap-2A基因的获得 | 第77-78页 |
| ·重组真核质粒的构建与鉴定 | 第78页 |
| ·Western blot鉴定目的蛋白表达 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| ABSTRACT | 第82-83页 |
| 第五章 表达修饰的Cap蛋白的真核质粒及其重组减毒沙门氏菌的免疫特性研究 | 第83-103页 |
| 摘要 | 第83-84页 |
| 1 材料 | 第84页 |
| ·质粒、菌株和病毒 | 第84页 |
| ·试剂 | 第84页 |
| ·实验动物 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-91页 |
| ·质粒的大量制备 | 第84-85页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第85-87页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的构建及鉴定 | 第87-88页 |
| ·仔猪攻毒保护试验 | 第88-91页 |
| ·数据统计分析 | 第91页 |
| 3 结果 | 第91-99页 |
| ·小鼠免疫试验结果 | 第91-93页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第93-94页 |
| ·猪体免疫攻毒试验结果 | 第94-99页 |
| 4 讨论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-102页 |
| ABSTRACT | 第102-103页 |
| 全文总结 | 第103-105页 |
| 附录 | 第105-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
