| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| 第一节 植物雄性不育 | 第17-30页 |
| 1 植物雄性不育的类型 | 第17-19页 |
| ·细胞质雄性不育 | 第17-18页 |
| ·细胞核雄性不育 | 第18页 |
| ·核-质互作雄性不育 | 第18-19页 |
| 2 植物雄性不育的细胞学基础 | 第19-21页 |
| ·花药与花粉发育 | 第19页 |
| ·植物雄性不育败育的时期和形式 | 第19-20页 |
| ·绒毡层发育异常影响花粉育性 | 第20-21页 |
| ·细胞程序性死亡影响花药发育 | 第21页 |
| 3 植物雄性不育与能量代谢 | 第21-23页 |
| 4 植物雄性不育的分子生物学基础 | 第23-27页 |
| ·线粒体与植物雄性不育 | 第23-26页 |
| ·叶绿体与植物雄性不育 | 第26-27页 |
| 5 枸杞雄性不育研究现状 | 第27-30页 |
| ·枸杞雄性不育的形态学及细胞学特征 | 第28-29页 |
| ·枸杞雄性不育生理生化特征 | 第29-30页 |
| 第二节 蛋白质组学研究概述 | 第30-41页 |
| 1. 蛋白质组学产生的背景 | 第30-31页 |
| 2. 蛋白质组学研究的内容 | 第31页 |
| 3. 蛋白质组学研究技术 | 第31-36页 |
| ·凝胶蛋白质组学研究技术 | 第31-33页 |
| ·质谱蛋白质组研究技术 | 第33-35页 |
| ·芯片蛋白质组学 | 第35-36页 |
| 4. 蛋白质组学在植物雄性不育研究中的应用 | 第36-38页 |
| ·不同组织和器官总蛋白质组学研究 | 第37-38页 |
| ·线粒体差异蛋白质组学研究 | 第38页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第38-41页 |
| 第二章 枸杞花药总蛋白提取及双向电泳体系的优化 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·枸杞花药蛋白的提取 | 第41-42页 |
| ·蛋白质定量 | 第42页 |
| ·等电聚焦(IEF) | 第42页 |
| ·SDS-PAGE | 第42-43页 |
| ·凝胶扫描和图谱分析 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·花药蛋白定量 | 第43页 |
| ·染色方法对2-DE图谱分辨率的影响 | 第43-44页 |
| ·IPG胶条PH范围对2-DE图谱分辨率的影响 | 第44-45页 |
| ·不同蛋白质裂解液对2-DE图谱分辨率的影响 | 第45页 |
| ·IEF上样量对2-DE图谱分辨率的影响 | 第45-46页 |
| ·枸杞花药蛋白2-DE体系的稳定性可重复性 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 枸杞雄性不育花药差异表达蛋白的分离及鉴定 | 第49-71页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·半薄和超薄切片的制备和观察 | 第50页 |
| ·花药总蛋白的提取、纯化及定量 | 第50页 |
| ·标记 | 第50页 |
| ·向荧光差异凝胶电泳分离蛋白 | 第50-51页 |
| ·扫描 | 第51页 |
| ·制备胶的制备 | 第51页 |
| ·胶内酶解及Ziptip脱盐 | 第51页 |
| ·质谱分析 | 第51页 |
| ·数据库检索 | 第51-52页 |
| ·酶活性测定 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-66页 |
| ·枸杞花药的形态学比较及花药败育时期的确定 | 第52-53页 |
| ·2D-银染预备实验 | 第53-54页 |
| ·花药蛋白质2D-DIGE分析 | 第54-56页 |
| ·差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第56-57页 |
| ·差异表达蛋白的功能分类 | 第57页 |
| ·差异表达蛋白参与的主要代谢途径 | 第57-65页 |
| ·差异表达蛋白的酶活性分析 | 第65-66页 |
| ·GS酶活性 | 第65页 |
| ·APX酶活性 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-71页 |
| 第四章 枸杞LB14-3-3基因的克隆及表达分析 | 第71-93页 |
| 1 材料与方法 | 第71-79页 |
| ·实验材料 | 第71-73页 |
| ·总RNA的提取、纯化及cDNA第一链的合成 | 第73页 |
| ·总RNA的提取(TRIZOL法) | 第73页 |
| ·RNA的纯化与检测 | 第73页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第73页 |
| ·Lb14-3-3基因cDNA保守区片段的克隆 | 第73-74页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·PCR扩增 | 第73-74页 |
| ·目的片段回收 | 第74页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备、连接、转化及鉴定 | 第74页 |
| ·Lb14-3-3基因3’端扩增(3’-RACE) | 第74-75页 |
| ·Lb14-3-3基因5’末端扩增(5’-RACE) | 第75-77页 |
| ·Lb14-3-3基因系统进化分析 | 第77页 |
| ·Lb14-3-3基因生物信息学分析 | 第77页 |
| ·Lb14-3-3基因表达分析(实时荧光定量PCR) | 第77-78页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·入门克隆pDONOR221-Lb14-3-3的获得 | 第79页 |
| ·目的载体pMDC83-Lb14-3-3的构建 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-90页 |
| ·Lb14-3-3基因cDNA全长的克隆及序列分析 | 第79-83页 |
| ·Lb14-3-3基因cDNA保守区序列的获得 | 第79-80页 |
| ·Lb14-3-3基因cDNA的3’-RACE克隆与序列分析 | 第80-81页 |
| ·Lb14-3-3基因cDNA的5’-RACE克隆与序列分析 | 第81-82页 |
| ·枸杞花药Lb14-3-3基因cDNA全长与序列分析 | 第82-83页 |
| ·枸杞花药Lb14-3-3基因的生物信息学分析 | 第83-89页 |
| ·枸杞花药Lb14-3-3基因编码蛋白的基本理化特性 | 第83-84页 |
| ·Lb14-3-3蛋白疏水性分析 | 第84-85页 |
| ·Lb14-3-3蛋白的跨膜信号分析 | 第85页 |
| ·Lb14-3-3蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第85-86页 |
| ·Lb14-3-3蛋白信号肽预测与分析 | 第86-87页 |
| ·Lb14-3-3蛋白磷酸化位点预测 | 第87页 |
| ·Lb14-3-3蛋白亚细胞定位预测及分析 | 第87-88页 |
| ·Lb14-3-3蛋白二级结构预测 | 第88页 |
| ·Lb14-3-3蛋白三级结构预测 | 第88-89页 |
| ·Lb14-3-3基因表达分析 | 第89页 |
| ·pMDC83-Lb14-3-3植物表达载体的构建 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-93页 |
| 第五章 枸杞花药查尔酮合成酶基因LbCHS的克隆及表达分析 | 第93-103页 |
| 1 材料与方法 | 第93-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-100页 |
| ·LbCHS基因cDNA克隆及分析 | 第94-96页 |
| ·LbCHS基因cDNA全长与序列分析 | 第96-97页 |
| ·LbCHS系统发生分析 | 第97-98页 |
| ·LbCHS生物信息学分析 | 第98-99页 |
| ·LbCHS基因表达分析 | 第99-100页 |
| ·pMDC83-LbCHS植物表达载体的构建 | 第100页 |
| 3 讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 枸杞R2R3类MYB基因LBMYB103的克隆及表达分析 | 第103-111页 |
| 1 材料与方法 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-109页 |
| ·LbMYB103基因cDNA克隆及分析 | 第104-105页 |
| ·LbMYB103多序列比对和系统发生分析 | 第105-106页 |
| ·LbMYB103基因生物信息学分析 | 第106-107页 |
| ·LbMYB103基因表达分析 | 第107-108页 |
| ·pMDC83-LbMYB103植物表达载体的构建 | 第108-109页 |
| 3 讨论 | 第109-111页 |
| 全文结论 | 第111-113页 |
| 本研究创新之处 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-131页 |
| 附录 | 第131-141页 |
| 附录一 实验方法 | 第131-137页 |
| 附录二 常用培养基和相关试剂的配置 | 第137-141页 |
| 攻读学位期间发表及待发表的学术论文 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
