| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 草菇的概述 | 第11-13页 |
| ·分类地位 | 第11页 |
| ·食药用价值 | 第11页 |
| ·生物学特性 | 第11页 |
| ·草菇采后生理生化变化 | 第11-12页 |
| ·草菇菌种的选育 | 第12-13页 |
| 2 植物的低温胁迫生理应答及抗性研究进展 | 第13-16页 |
| ·植物的低温胁迫应答 | 第13-16页 |
| ·低温对植物细胞膜的影响 | 第13-14页 |
| ·植物抗寒基因研究进展 | 第14-16页 |
| 3 草菇的低温胁迫应答研究进展 | 第16-17页 |
| ·低温胁迫对草菇细胞膜的影响 | 第16页 |
| ·草菇冷诱导基因的研究 | 第16-17页 |
| 4 差异基因表达研究进展 | 第17-20页 |
| ·基因芯片技术 | 第18页 |
| ·差异显示技术 | 第18-19页 |
| ·抑制消减杂交技术(SSH) | 第19页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第19-20页 |
| 5 mRNA检测技术 | 第20-21页 |
| ·Northern杂交 | 第20页 |
| ·实时定量PCR技术 | 第20-21页 |
| 6 本研究的目的和内容 | 第21-23页 |
| 第二章 草菇低温表达谱的制备及数据分析 | 第23-53页 |
| 1 材料与方法 | 第23-24页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·化学试剂 | 第23页 |
| ·仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-27页 |
| ·培养基的配置 | 第24页 |
| ·草菇菌丝的处理及收集 | 第24页 |
| ·草菇菌丝总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·草菇低温表达谱文库构建方法 | 第25-27页 |
| ·mRNA抽提 | 第25-26页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第26页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第26-27页 |
| ·补平cDNA中缺口 | 第27页 |
| ·按照454测序的protocal建库 | 第27页 |
| ·草菇低温表达谱的数据分析 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-47页 |
| ·RNA的质量与浓度 | 第27页 |
| ·草菇V23菌株高表达基因 | 第27-33页 |
| ·草菇VH3菌株高表达基因 | 第33-38页 |
| ·草菇V23菌株差异表达基因 | 第38-44页 |
| ·草菇VH3菌株差异表达基因 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-52页 |
| ·在草菇低温表达谱中的低温胁迫应答基因 | 第47-48页 |
| ·冷诱导后差异表达基因涉及的生化过程 | 第48-52页 |
| ·能量代谢途径 | 第48-49页 |
| ·磷脂代谢途径 | 第49-50页 |
| ·信号转导途径 | 第50页 |
| ·渗透压调节 | 第50-51页 |
| ·蛋白质的合成及降解 | 第51页 |
| ·内标基因的筛选 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 草菇低温表达谱中的冷诱导相关基因表达量变化分析 | 第53-75页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·材料、仪器、试剂 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| 2 试验方法 | 第54-59页 |
| ·草菇菌丝总RNA的提取 | 第55页 |
| ·草菇总RNA中基因组DNA的酶解 | 第55页 |
| ·草菇菌丝RNA的反转录 | 第55页 |
| ·目的基因序列的生物信息学分析及编码区的获得 | 第55-56页 |
| ·试验中PCR的引物序列 | 第56页 |
| ·目的片段的扩增 | 第56-57页 |
| ·制备标准品质粒 | 第57-58页 |
| ·目的基因表达量的定量测定 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-71页 |
| ·RNA质量的检验 | 第59页 |
| ·a-微观蛋白编码区的获得 | 第59-60页 |
| ·3-磷酸甘油酰基转移酶编码区的获得 | 第60页 |
| ·海藻糖磷酸化酶编码区的获得 | 第60页 |
| ·糖原磷酸化酶编码区的获得 | 第60页 |
| ·目的基因表达量的测定 | 第60-71页 |
| ·目的条带的扩增 | 第60-61页 |
| ·目的条带的回收 | 第61-62页 |
| ·克隆测序 | 第62页 |
| ·目的基因及内标基因的扩增曲线 | 第62-64页 |
| ·目的基因及内标基因的标准曲线 | 第64-65页 |
| ·目的基因及内标基因的溶解曲线分析 | 第65-67页 |
| ·定量结果 | 第67-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| ·细胞膜上磷脂合成与草菇菌株耐寒性分析 | 第71-72页 |
| ·小分子糖类合成与草菇菌株耐寒性分析 | 第72-73页 |
| 5 小结 | 第73-75页 |
| 第四章 草菇低温刺激后不饱和脂肪酸代谢途径中关键基因表达量变化分析 | 第75-87页 |
| 1 材料与方法 | 第75页 |
| ·材料、仪器、试剂 | 第75页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·仪器及试剂 | 第75页 |
| 2 试验方法 | 第75-76页 |
| ·草菇菌丝总RNA的提取 | 第75页 |
| ·草菇总RNA中基因组DNA的酶解 | 第75页 |
| ·草菇菌丝RNA的反转录 | 第75页 |
| ·目的基因序列的生物信息学的分析及编码区的获得 | 第75页 |
| ·试验中PCR的引物序列 | 第75-76页 |
| ·目的片段的扩增 | 第76页 |
| ·制备标准品质粒 | 第76页 |
| ·目的基因表达量的定量测定 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-84页 |
| ·△-9不饱和脂肪酸脱氢酶编码区的获得 | 第76-77页 |
| ·△-12不饱和脂肪酸脱氢酶编码区的获得 | 第77页 |
| ·目的基因表达量的测定 | 第77-84页 |
| ·目的条带的扩增 | 第77页 |
| ·目的条带的回收 | 第77-78页 |
| ·克隆测序 | 第78页 |
| ·目的基因及内标基因的扩增曲线 | 第78-79页 |
| ·目的基因及内标基因的标准曲线 | 第79-80页 |
| ·目的基因及内标基因的溶解曲线分析 | 第80-81页 |
| ·定量结果 | 第81-84页 |
| 4 讨论 | 第84-85页 |
| 5 小结 | 第85-87页 |
| 第五章 全文讨论与总结 | 第87-89页 |
| 附录 | 第89-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 致谢 | 第103页 |