| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 关于保护性耕作 | 第13-16页 |
| ·保护性耕作的概念 | 第13页 |
| ·国内外研究现状分析 | 第13-14页 |
| ·国外保护性耕作发展应用 | 第14-15页 |
| ·我国保护性耕作发展应用 | 第15页 |
| ·我国南方保护性耕作的发展情况 | 第15-16页 |
| 2 土壤微生物多样性 | 第16-20页 |
| ·土壤微生物多样性的研究方法 | 第17-19页 |
| ·传统培养分离方法 | 第17-18页 |
| ·Biolog GN鉴定系统 | 第18页 |
| ·磷脂脂肪酸方法 | 第18-19页 |
| ·分子生物学方法 | 第19页 |
| ·变性梯度凝胶电泳(DGGE) | 第19-20页 |
| 3 保护性耕作生态效应的研究进展 | 第20-22页 |
| ·保护保护性耕作对土壤养分的影响 | 第21页 |
| ·保护性耕作对土壤有机质的影响 | 第21页 |
| ·保护性耕作对土壤氮、磷、钾的影响 | 第21页 |
| ·保护性耕作对土壤微生物的影响 | 第21-22页 |
| ·微生物生物量 | 第21-22页 |
| ·微生物多样性 | 第22页 |
| ·土壤酶 | 第22页 |
| 4 关于纤维素降解菌 | 第22-29页 |
| ·木质纤维素的结构组成 | 第22-23页 |
| ·纤维素降解菌类型 | 第23-24页 |
| ·降解纤维素的细菌类型 | 第23-24页 |
| ·降解纤维素的真菌类型 | 第24页 |
| ·降解纤维素的放线菌类型 | 第24页 |
| ·纤维素酶系 | 第24页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第24-25页 |
| ·羧甲基纤维素钠(CMC-Na)刚果红平板筛选纤维素降解菌原理 | 第25-26页 |
| ·纤维素酶作用机制 | 第26-27页 |
| ·C1-Cx假说 | 第26页 |
| ·顺序作用假说 | 第26-27页 |
| ·协同作用模型 | 第27页 |
| ·纤维素酶基因克隆 | 第27-29页 |
| 第一章 保护性耕作对土壤微生物群落结构的影响 | 第29-43页 |
| 1 实验设计 | 第29-30页 |
| 2 土样采集 | 第30页 |
| 3 试验原理及步骤 | 第30-33页 |
| ·直接法提取土样中微生物总DNA | 第30页 |
| ·总DNA的回收与纯化 | 第30-31页 |
| ·细菌16S rDNAV3区的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·真菌18S rDNA的PCR扩增 | 第32页 |
| ·变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析 | 第32-33页 |
| ·实验数据统计分析 | 第33页 |
| ·群落结构多样性评价指数的计算方法 | 第33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·土壤总DNA的提取和纯化 | 第33-34页 |
| ·细菌16S rDNAV3区的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·真菌18S rDNA的PCR扩增 | 第35页 |
| ·细菌16S rDNA V3区DGGE图谱分析 | 第35-37页 |
| ·真菌18S rDNA DGGE图谱分析 | 第37-39页 |
| ·通过DGGE图谱对土壤微生物进行多样性指数分析 | 第39-40页 |
| 5 本章小结 | 第40-43页 |
| 第二章 保护性耕作对土壤中纤维素降解菌数量的影响 | 第43-49页 |
| 1 实验设计 | 第43页 |
| 2 土样采集 | 第43页 |
| 3 试验原理及步骤 | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-47页 |
| 5 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 纤维素降解菌的筛选、分离、鉴定及功能基因初步研究 | 第49-59页 |
| 1 试验设计 | 第49页 |
| 2 供试土壤 | 第49页 |
| 3 试验原理及步骤 | 第49-53页 |
| ·纤维素降解菌的分离和纯化 | 第49页 |
| ·纤维素降解菌的发酵培养 | 第49页 |
| ·细菌16S rDNA序列鉴定 | 第49-52页 |
| ·菌株基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增16S rDNA基因 | 第50页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备方法 | 第50-51页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第51页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第51页 |
| ·SDS碱裂解法小量提取重组质粒DNA | 第51-52页 |
| ·目的基因序列测定与分析 | 第52页 |
| ·内切纤维素酶基因的克隆 | 第52-53页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·内切纤维素酶基因的PCR扩增 | 第52页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第52-53页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第53页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第53页 |
| ·SDS碱裂解法小量提取重组质粒DNA | 第53页 |
| ·序列测定 | 第53页 |
| 4 结果与分析 | 第53-57页 |
| ·纤维素降解菌的分离和纯化 | 第53-54页 |
| ·土壤纤维素降解菌的初步鉴定 | 第54-55页 |
| ·序列测定与分析 | 第55页 |
| ·内切纤维素酶基因的克隆 | 第55页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第55-56页 |
| ·重组质粒测序与分析 | 第56-57页 |
| 5 本章小结 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 论文的创新点和不足之处 | 第67-69页 |
| 附录一 培养基及主要试剂的配制方法 | 第69-71页 |
| 附录二 主要仪器设备 | 第71-72页 |
| 附录三 相似性矩阵 | 第72-75页 |
| 附录四 相关DNA序列 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79页 |