| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-23页 |
| ·体细胞重编程 | 第11-18页 |
| ·体细胞重编程历史 | 第11-12页 |
| ·诱导多能干细胞 | 第12-14页 |
| ·iPS的应用 | 第14-15页 |
| ·iPS存在的问题及可能的解决方法 | 第15-16页 |
| ·国内外研究现状和发展趋势 | 第16-17页 |
| ·胚胎干细胞和诱导多能干细胞研究的药物 | 第17-18页 |
| ·miRNA的功能与调控作用 | 第18-21页 |
| ·miRNA的定义 | 第18-19页 |
| ·miRNA的历史 | 第19-20页 |
| ·miRNA参与的生物过程 | 第20页 |
| ·miRNA与对干细胞重编程的影响 | 第20页 |
| ·miRNA与ES细胞转录因子形成的调控网络 | 第20页 |
| ·miRNA在ES细胞分裂周期中的调控作用 | 第20-21页 |
| ·p53的功能和研究现状 | 第21-23页 |
| ·p53的历史 | 第21页 |
| ·人们对p53的重新认识 | 第21-22页 |
| ·p53参与的生命过程 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-49页 |
| ·各种实验材料 | 第23-24页 |
| ·细胞方面 | 第23页 |
| ·各种细胞培养所用试剂 | 第23页 |
| ·各种实验耗材 | 第23页 |
| ·各种试剂盒 | 第23-24页 |
| ·各种酶类 | 第24页 |
| ·合成引物及DNA测序 | 第24页 |
| ·各种抗体 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-49页 |
| ·CaC12法感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·质粒的构建过程 | 第26-28页 |
| ·回收PCR产物 | 第26-27页 |
| ·DNA片段及质粒载体的酶切 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·感受态细胞的转化方法 | 第27-28页 |
| ·减法质粒抽取 | 第28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第28-30页 |
| ·所需试剂 | 第28-29页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第29页 |
| ·分离胶和浓缩胶的制备 | 第29-30页 |
| ·Western Blot | 第30-31页 |
| ·各种试剂 | 第30页 |
| ·Western Blot实验步骤 | 第30-31页 |
| ·考马斯亮蓝染色及脱色 | 第31页 |
| ·细胞培养技术 | 第31-33页 |
| ·细胞培养条件 | 第31页 |
| ·配制培养基及细胞冻存液 | 第31-32页 |
| ·细胞的复苏、培养与传代 | 第32页 |
| ·细胞的冻存 | 第32-33页 |
| ·细胞的计数 | 第33页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第33页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第33-35页 |
| ·总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·逆转录(RT)反应 | 第34页 |
| ·定量PCR检测 | 第34-35页 |
| ·iPS的诱导步骤 | 第35-39页 |
| ·小鼠成纤维细胞或饲养层细胞的制备方法 | 第35-37页 |
| ·iPS的诱导过程 | 第37-39页 |
| ·iPS细胞的传代与复苏 | 第39页 |
| ·免疫荧光染色步骤 | 第39-40页 |
| ·流式细胞术 | 第40-41页 |
| ·畸胎瘤形成实验 | 第41页 |
| ·miRNA的体外剪切 | 第41-46页 |
| ·准备有放射性的pri-miRNA的转录本 | 第41-42页 |
| ·pri-miRNA的转录 | 第42-44页 |
| ·IP实验 | 第44-45页 |
| ·体外pri-miRNA的加工剪切实验 | 第45-46页 |
| ·免疫共沉淀实验和质谱分析 | 第46-47页 |
| ·拟胚体实验 | 第47-49页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·结果分析 | 第50-62页 |
| ·抑制miR-199a-3p能够促进小鼠成纤维细胞的重编程 | 第50-54页 |
| ·通过抑制miR-199a-3p得到的iPS细胞具有多能性 | 第54-56页 |
| ·miR-199a-3p能使细胞周期阻滞在Gl期 | 第56-58页 |
| ·p53通过调节miR-199a-3p的加工来影响干细胞的重编程 | 第58-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 H2afz影响干细胞分化并促进体细胞重编程 | 第65-81页 |
| ·引言 | 第65-66页 |
| ·iPS技术残生的背景 | 第65页 |
| ·Nanog的能 | 第65页 |
| ·组蛋白及组蛋白变异体H2afz的功能研究 | 第65-66页 |
| ·课题的概述 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-81页 |
| ·Nanog与H2afz结合 | 第68-69页 |
| ·外源的H2afz能够增加外源的Nanog的蛋白水平 | 第69-70页 |
| ·外源的H2afz能够稳定外源的Nanog表达 | 第70-71页 |
| ·外源的H2afz能够稳定外源的Nanog表达 | 第71页 |
| ·干细胞中富含H2afz | 第71-72页 |
| ·在分化过程中,H2afz随之下降 | 第72-74页 |
| ·敲低H2afz促使干细胞分化 | 第74-76页 |
| ·敲低H2afz后导致内源的Nanog大量降解 | 第76-77页 |
| ·敲低H2afz后导致干细胞重编程不能进行 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 附录1 所获奖励和参加会议情况 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第87页 |
