| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·草甘膦的发展及作用机理 | 第13-17页 |
| ·草甘膦生产及发展 | 第13页 |
| ·草甘膦结构及理化性质 | 第13-14页 |
| ·草甘膦的特点及作用机理 | 第14-15页 |
| ·草甘膦的优缺点 | 第15-17页 |
| ·草甘膦抗性资源的获得 | 第17-20页 |
| ·天然草甘膦抗性 | 第17-18页 |
| ·细胞与组织培养 | 第18页 |
| ·基于诱变筛选的传统育种方法 | 第18-19页 |
| ·草甘膦靶标酶基因 EPSPS 及其编码基因的突变 | 第19页 |
| ·降解酶基因的导入或微生物降解 | 第19-20页 |
| ·对草甘膦产生抗性的作用机制 | 第20-21页 |
| ·EPSPS 基因的扩增或过量表达 | 第20页 |
| ·EPSPS 基因突变后的蛋白质产物对草甘膦不敏感 | 第20页 |
| ·导入与草甘膦亲和性下降的 EPSPS | 第20-21页 |
| ·基因产物迅速将草甘膦降解为无毒物质 | 第21页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法研究概况 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量 PCR 简介 | 第21页 |
| ·内参基因的选择 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术的应用 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·本研究技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·供试菌种与载体 | 第24页 |
| ·供试除草剂 | 第24页 |
| ·供试培养基配置方法 | 第24页 |
| ·常用试剂配制方法 | 第24-25页 |
| ·试剂盒、酶及其它试剂耗材 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·菌株 ND-H 的分离鉴定及培养条件的优化 | 第26-29页 |
| ·菌株 ND-H 的富集、分离与纯化 | 第26页 |
| ·18S rDNA 的 PCR 扩增和序列测定 | 第26-28页 |
| ·5.8S rDNA-ITS 的 PCR 扩增和序列测定 | 第28页 |
| ·系统发育树的构建 | 第28-29页 |
| ·菌株 ND-H 最佳生长条件测定 | 第29页 |
| ·菌株 ND-H 的基因组文库构建 | 第29-33页 |
| ·ND-H 总 DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·基因组文库的构建及文库质量鉴定 | 第30-33页 |
| ·草甘膦抗性重组子的筛选 | 第33页 |
| ·抗性重组子的序列分析 | 第33页 |
| ·EPSPS 基因的原核表达研究 | 第33-36页 |
| ·制备带酶切位点的基因片段 | 第33-34页 |
| ·制备载体 | 第34-35页 |
| ·连接重组质粒 | 第35页 |
| ·重组质粒的测序验证 | 第35页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定 | 第36页 |
| ·aroM 基因的分离与实时荧光定量表达分析 | 第36-39页 |
| ·aroM 基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·生物信息学分析 | 第37页 |
| ·实时荧光定量表达试验材料 | 第37页 |
| ·ND-H 的 aroM 各组成基因的表达分析 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-65页 |
| ·菌株 ND-H 的鉴定及最佳生长条件 | 第39-44页 |
| ·菌株的分离与形态学特征 | 第39页 |
| ·18S rDNA 序列分析及系统发育树构建 | 第39-41页 |
| ·5.8S rDNA-ITS 序列分析及系统发育树构建 | 第41-43页 |
| ·菌株 ND-H 的最佳生长条件 | 第43-44页 |
| ·菌株 ND-H 的基因组文库构建 | 第44-50页 |
| ·ND-H 总 DNA 质量分析 | 第44-45页 |
| ·基因组文库构建 | 第45-46页 |
| ·文库质量鉴定 | 第46-47页 |
| ·草甘膦抗性重组子的筛选 | 第47-48页 |
| ·草甘膦抗性重组子的序列分析 | 第48-50页 |
| ·EPSPS 基因原核表达研究 | 第50-54页 |
| ·制备带酶切位点的基因片段 | 第50-51页 |
| ·原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定 | 第53-54页 |
| ·aroM 基因克隆与表达分析 | 第54-65页 |
| ·aroM 基因序列 | 第54-59页 |
| ·aroM 基因序列的生物信息学分析 | 第59-61页 |
| ·草甘膦诱导 ND-H 的 aroM 基因表达研究 | 第61-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| ·高效菌株的筛选 | 第65页 |
| ·真菌物种的分类鉴定 | 第65-66页 |
| ·丝状真菌生长曲线测定方法 | 第66页 |
| ·基因表达方法 | 第66-67页 |
| ·关于 aroM 基因的进一步研究 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75页 |
