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根结线虫拮抗放线菌的筛选及菌株HA10002和DA09202活性物质的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
目录第8-13页
1 前言第13-49页
   ·根结线虫及其危害第13-20页
     ·根结线虫的分类地位第13页
     ·根结线虫的生物学特性第13-15页
     ·根结线虫的主要种类与分布第15-18页
     ·根结线虫的危害第18-20页
   ·根结线虫的防治研究第20-33页
     ·根结线虫的化学药剂防治研究第20-22页
     ·根结线虫的生防菌研究现状第22-30页
       ·食线虫真菌第22-26页
       ·细菌第26-28页
       ·放线菌第28-29页
       ·其他生物的利用第29-30页
     ·抗线虫作物的选育及抗线虫基因工程第30-33页
   ·具有杀线虫活性的天然产物的研究第33-44页
     ·植物源天然产物第34-35页
     ·微生物源杀线虫代谢物的研究第35-44页
       ·真菌杀线虫代谢物的研究第35-40页
       ·细菌杀线虫代谢物第40-42页
       ·放线菌产生的具有杀虫活性的天然抗生素第42-44页
   ·防治线虫病害的微生物农药及其发展前景第44-47页
     ·防治线虫病害的细菌源微生物农药第45页
     ·防治线虫病害的真菌源微生物农药第45-46页
     ·展望第46-47页
   ·本研究的目的及意义第47-49页
2 材料与方法第49-70页
   ·实验材料第49-53页
     ·主要试剂第49-50页
     ·主要溶液第50页
     ·主要仪器第50-51页
     ·主要培养基第51-53页
       ·放线菌分离培养基第51页
       ·放线菌分类鉴定培养基(培养特征)第51-52页
       ·放线菌分类鉴定培养基(生理生化特征)第52-53页
       ·放线菌发酵培养基第53页
       ·其他培养基第53页
   ·供试线虫第53-54页
     ·靶标线虫的来源第53页
     ·根结线虫二龄幼虫液的制备第53-54页
   ·放线菌的分离与筛选第54-56页
     ·样品来源第54页
     ·样品处理第54页
     ·分离方法第54-55页
     ·菌株发酵液的制备第55页
     ·抗线虫活性菌株的筛选第55-56页
       ·初筛第55页
       ·复筛第55-56页
     ·菌株的保存第56页
   ·放线菌的分类鉴定第56-62页
     ·形态学特征第56页
     ·生理生化特征第56-58页
       ·碳源利用第56-57页
       ·纤维素上生长第57页
       ·淀粉水解第57页
       ·明胶液化第57页
       ·牛奶凝固胨化第57页
       ·硝酸盐还原第57-58页
       ·H_2S产生第58页
       ·黑色素产生第58页
     ·放线菌16S rDNA序列测定及系统发育分析第58-62页
       ·放线菌菌株基因组DNA的提取(萨姆布鲁克等,2003)第58-59页
       ·16S rDNA的PCR扩增第59页
       ·PCR扩增产物的回收第59-60页
       ·连接反应第60页
       ·E.coli DH5α感受态细胞的制备第60-61页
       ·连接产物的转化第61页
       ·重组质粒的PCR鉴定第61-62页
       ·系统发育分析第62页
   ·放线菌HA10002和DA09202合成活性物质发酵条件的优化第62-66页
     ·培养方法第62-63页
     ·检测方法第63页
     ·培养基组成对菌株HA10002和DA09202产活性物质的影响第63-64页
       ·碳源对菌株活性的影响第63页
       ·碳源浓度对菌株活性的影响第63页
       ·氮源对菌株活性的影响第63页
       ·氮源浓度对菌株活性的影响第63页
       ·碳源、氮源正交优化实验第63-64页
       ·K_2HPO_4对菌株活性的影响第64页
     ·培养条件对菌株HA10002和DA09202产活性物质的影响第64-66页
       ·温度对菌株活性的影响第64-65页
       ·初始pH对菌株活性的影响第65页
       ·发酵时间对菌株活性的影响第65页
       ·接种量的影响第65页
       ·装液量的影响第65页
       ·种龄的影响第65页
       ·摇床转速的影响第65-66页
   ·菌株HA10002活性物质的分离纯化与结构鉴定第66-70页
     ·分离纯化预实验第66-67页
       ·稳定性试验第66页
       ·有机溶剂萃取试验第66页
       ·溶解性试验第66-67页
       ·薄层层析第67页
     ·活性物质的分离纯化第67-69页
       ·抗虫活性物质的制备第67-68页
       ·活性物质的纯度检测第68-69页
     ·活性物质的结构鉴定第69-70页
       ·紫外与可见光谱分析(UV-Vis)第69页
       ·核磁共振(NMR)第69页
       ·质谱分析(MS)第69-70页
3 结果与分析第70-106页
   ·根结线虫拮抗放线菌的分离与筛选第70-73页
     ·放线菌的分离第70页
     ·线虫拮抗放线菌的筛选第70-72页
       ·初筛结果第70-71页
       ·复筛结果第71-72页
     ·菌株HA10002、DA09202和DA09205的传代稳定性第72-73页
   ·放线菌的分类鉴定第73-82页
     ·菌株HA10002的分类鉴定第73-76页
       ·形态学特征第73-74页
       ·生理生化特征第74页
       ·16SrDNA序列测定及系统发育分析第74-75页
       ·菌株HA10002的鉴定结果第75-76页
     ·菌株DA09202的分类鉴定第76-79页
       ·形态学特征第76-77页
       ·生理生化特征第77页
       ·16SrDNA序列测定及系统发育分析第77-78页
       ·菌株DA09202的鉴定结果第78-79页
     ·菌株DA09205的分类鉴定第79-82页
       ·形态学特征第79-80页
       ·生理生化特征第80-81页
       ·16SrDNA序列测定及系统发育分析第81页
       ·菌株DA09205的鉴定结果第81-82页
   ·菌株HA10002和DA09202产活性物质发酵条件的优化第82-93页
     ·培养基组成对菌株HA10002和DA09202产活性物质的影响第82-88页
       ·碳源对菌株活性的影响第82-83页
       ·氮源对菌株活性的影响第83页
       ·碳源浓度对菌株活性的影响第83-84页
       ·氮源浓度对菌株活性的影响第84-85页
       ·碳、氮源正交优化实验第85-87页
       ·K_2HPO_4对活性的影响第87-88页
     ·培养条件对菌株HA10002和DA09202产活性物质的影响第88-93页
       ·温度对菌株活性的影响第88页
       ·初始pH对菌株活性的影响第88-89页
       ·接种量对菌株活性的影响第89-90页
       ·装液量对菌株活性的影响第90页
       ·发酵时间对菌株活性的影响第90-91页
       ·种龄对菌株活性的影响第91页
       ·摇床转速对菌株活性的影响第91页
       ·海水含量对海洋菌株HA10002活性的影响第91-93页
   ·菌株HA10002活性物质的分离纯化与结构鉴定第93-106页
     ·分离纯化预实验第93-97页
       ·稳定性试验第93-95页
       ·有机溶剂萃取试验第95页
       ·薄层层析试验第95-97页
     ·活性物质的分离纯化第97-98页
       ·活性物质的萃取第97页
       ·活性组分的制备第97页
       ·活性化合物的分离纯化第97-98页
     ·活性物质的结构鉴定第98-106页
       ·化合物A22-1(S1)的结构鉴定第98-101页
       ·化合物A26-3(S2)的结构鉴定第101-102页
       ·菌株DA09202活性化合物A46-2(S3)的结构鉴定第102-106页
4 讨论第106-118页
   ·土壤及海洋放线菌的分布与分离第106-108页
   ·杀虫活性物质的筛选模型第108-110页
   ·活性菌株的作用机制第110-111页
   ·发酵工艺的优化第111-114页
   ·菌株HA10002活性物质的分离纯化第114-115页
   ·本文的创新意义第115-118页
5 结论第118-120页
参考文献第120-135页
简略词表第135-136页
附录第136-145页
致谢第145页

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