| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第11页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白 | 第11-16页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的结构 | 第12-13页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的鉴定方法 | 第13-14页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第14-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌cry 基因的分类及其鉴定 | 第16-19页 |
| ·生物信息学在Bt 杀虫晶体蛋白基因挖掘中的应用 | 第19-20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌对重要的农业害虫的防治 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-30页 |
| ·试验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第24页 |
| ·培养基与抗生素 | 第24-25页 |
| ·供试昆虫 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-30页 |
| ·菌株的分离 | 第25页 |
| ·晶体观察与显微镜样品制备 | 第25页 |
| ·模板制备 | 第25-26页 |
| ·PCR 反应 | 第26页 |
| ·酶切分析 | 第26页 |
| ·Bt 总DNA 提取 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·DNA 回收 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·E.coli 感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| ·E.coli 的转化 | 第28页 |
| ·E.coli 质粒DNA 提取 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳检测 | 第28-29页 |
| ·序列测定及分析 | 第29页 |
| ·杀虫活性测定 | 第29页 |
| ·数据分析处理 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-59页 |
| ·菌株的分离 | 第30页 |
| ·菌株的伴孢晶体形态 | 第30-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌cry1 类基因的鉴定 | 第31页 |
| ·Bt 菌株LB-R-78 基因型的鉴定 | 第31-32页 |
| ·Bt 菌株LB-R-78 伴孢晶体形态的观察 | 第31-32页 |
| ·Bt 菌株LB-R-78 cry 基因的鉴定 | 第32页 |
| ·cry1Ca13 全长基因的克隆与表达及生物活性测定 | 第32-40页 |
| ·cry1Ca13 基因全长引物的设计 | 第32-33页 |
| ·cry1Ca 全长基因的克隆及表达载体的构建 | 第33页 |
| ·cry1Ca13 基因的序列测定及分析 | 第33-39页 |
| ·cry1Ca13 基因在E.coli Rosetta(DE3)中的表达 | 第39-40页 |
| ·Cry1Ca 表达蛋白杀虫活性测定 | 第40页 |
| ·Bt 菌株LS-R-21、LS-R-30 基因型的鉴定 | 第40-41页 |
| ·Bt 菌株LS-R-21、LS-R-30 晶体形态观察 | 第40-41页 |
| ·Bt LS-R-21、LS-R-30 菌株的cry 基因鉴定 | 第41页 |
| ·cry1Aa cry1Ab 基因全长通用引物的设计 | 第41-42页 |
| ·cry1Aa19 全长基因的克隆与表达及生物活性测定 | 第42-50页 |
| ·cry1Aa19 全长基因的克隆 | 第42页 |
| ·cry1Aa19 基因的序列测定及分析 | 第42-48页 |
| ·cry1Aa19 基因在E.coli Rosetta(DE3)中的表达 | 第48-49页 |
| ·Cry1Aa 表达蛋白杀虫活性测定 | 第49-50页 |
| ·cry1Ab25 全长基因的克隆与表达及生物活性测定 | 第50-59页 |
| ·cry1Ab25 全长基因的克隆 | 第50页 |
| ·cry1Ab25 基因的序列测定及分析 | 第50-56页 |
| ·cry1Ab25 基因在E.coli Rosetta(DE3)中的表达 | 第56-57页 |
| ·Cry1Ab 表达蛋白杀虫活性测定 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
