缩略词表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
前言 | 第11-15页 |
材料与方法 | 第15-26页 |
1.材料 | 第15-16页 |
·菌株与细胞株 | 第15页 |
·质粒 | 第15页 |
·常用分子生物学试剂盒 | 第15页 |
·细胞培养试剂 | 第15-16页 |
·其他分子生物学试剂和化学试剂 | 第16页 |
·抗体 | 第16页 |
·主要实验仪器 | 第16页 |
2. 方法 | 第16-26页 |
·Western blot分析 | 第16-17页 |
·免疫共沉淀 | 第17-18页 |
·pCDH-GA5重组质粒构建与鉴定 | 第18-21页 |
·GA5过表达稳定克隆的制备 | 第21-22页 |
·GA5敲低稳定克隆的制备 | 第22-23页 |
·实时荧光定量(Real-time)RT-PCR | 第23-24页 |
·细胞免疫荧光染色 | 第24页 |
·细胞生长曲线测定 | 第24页 |
·软琼脂集落形成实验 | 第24-25页 |
·平板克隆形成实验 | 第25-26页 |
结果 | 第26-38页 |
第一部分 GA5与ERβ相互作用的验证及在乳腺癌中的表达 | 第26-29页 |
一、免疫共沉淀实验验证GA5与ERβ在体内的相互作用 | 第26页 |
二、GA5在乳腺癌细胞系中普遍表达 | 第26-27页 |
三、GA5在人乳腺癌组织中的表达 | 第27-29页 |
第二部分 GA5过表达稳定转染乳腺癌细胞系的获得 | 第29-33页 |
一、pCDH-GA5重组表达载体的构建及表达鉴定 | 第29-31页 |
二、慢病毒介导的GA5过表达乳腺癌细胞株的获得 | 第31-33页 |
第三部分 GA5敲低稳定转染乳腺癌细胞系的获得 | 第33-35页 |
一、mRNA水平检测GA5siRNA干扰效果 | 第33页 |
二、蛋白水平检测GA5siRNA干扰效果 | 第33-34页 |
三、敲低GA5细胞免疫荧光 | 第34-35页 |
第四部分 GA5对乳腺癌细胞生长的调节作用 | 第35-38页 |
一、GA5对乳腺癌细胞锚定依赖性生长的影响 | 第35-36页 |
二、GA5对乳腺癌细胞锚定非依赖性生长的影响 | 第36-37页 |
三、GA5对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响 | 第37-38页 |
讨论 | 第38-41页 |
结论 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-47页 |
文献综述 | 第47-56页 |
参考文献 | 第52-56页 |
个人简历 | 第56页 |
攻读硕士期间论文发表情况 | 第56-57页 |
致谢 | 第57-58页 |