| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 抑癌基因LKB1克隆 | 第13-22页 |
| ·材料与方法 | 第13-19页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·主要载体及试剂 | 第13页 |
| ·主要仪器设备 | 第13-14页 |
| ·方法 | 第14-19页 |
| ·总RNA提取和反转录获得单链cDNA | 第14-15页 |
| ·PCR引物的设计和PCR反应条件 | 第15-16页 |
| ·PCR产物回收 | 第16-17页 |
| ·感受态细胞制备 | 第17页 |
| ·PCR片段与载体的连接及连接产物的转化 | 第17页 |
| ·重组质粒的提取 | 第17-19页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第19页 |
| ·测序结果分析 | 第19页 |
| ·结果与分析 | 第19-22页 |
| ·人肝脏总RNA提取与检测 | 第19-20页 |
| ·PCR扩增LKB1基因 | 第20页 |
| ·PCR产物的回收 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第21页 |
| ·测序结果及比对结果 | 第21-22页 |
| ·讨论 | 第22页 |
| 第二章 构建pEGFP-N1-LKB1的表达载体并转染肺腺癌(A549)细胞 | 第22-31页 |
| ·材料与方法 | 第23-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第23页 |
| ·主要试剂及试验材料 | 第23页 |
| ·表达载体PEGFP-N1-LKB1的构建和转化 | 第23-26页 |
| ·PEGFP-N1载体结构 | 第23-24页 |
| ·相关载体的酶切及连接 | 第24-25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·pEGFP-N1-LKB1的筛选及鉴定 | 第26-27页 |
| ·试剂盒提取质粒并电泳 | 第26页 |
| ·单双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·A549细胞的培养 | 第27-29页 |
| ·灭菌实验用品及试剂 | 第27页 |
| ·配制各种药品 | 第27-28页 |
| ·细胞培养 | 第28页 |
| ·细胞传代 | 第28页 |
| ·冻存细胞 | 第28-29页 |
| ·质粒pEGFP-N1和pEGFP-N1-LKB1转染A549细胞 | 第29页 |
| ·倒置荧光显微镜观察转染效率 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-31页 |
| ·构建表达载体pEGFP-N1-LKB1并单双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·质粒pEGFP-N1和pEGFP-N1-LKB1转染A549细胞 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31页 |
| 第三章 MTT法检测LKB1基因对A549细胞生长增值的作用 | 第31-34页 |
| ·材料与方法 | 第31-32页 |
| ·肺腺癌细胞A549的培养 | 第31页 |
| ·主要试剂及试验材料 | 第31页 |
| ·复苏细胞 | 第31-32页 |
| ·方法(MTT法) | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·pEGFP-N1-LKB1转染 | 第32-33页 |
| ·LKB1基因表达对A549细胞生长影响 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34页 |
| 第四章 Western blot检测目的基因的蛋白表达 | 第34-40页 |
| ·材料与方法 | 第34-38页 |
| ·肺腺癌细胞A549的培养 | 第34页 |
| ·主要试剂及试验材料 | 第34页 |
| ·表达载体pEGFP-N1-LKB1转染肺腺癌细胞 | 第34-35页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第35页 |
| ·测定蛋白浓度 | 第35页 |
| ·Western blot检测 | 第35-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-40页 |
| ·LKB1蛋白浓度测定 | 第39页 |
| ·LKB1基因在肺腺癌细胞中的蛋白表达量 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| 第五章 结论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-43页 |
| 文献综述 | 第43-51页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
