| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| ·角质 | 第12-13页 |
| ·角质的分布 | 第12页 |
| ·角质的组成及结构 | 第12页 |
| ·棉纤维中的角质 | 第12-13页 |
| ·角质酶的性质及应用 | 第13-17页 |
| ·角质酶的来源 | 第13页 |
| ·角质酶的理化性质 | 第13-16页 |
| ·角质酶的应用 | 第16-17页 |
| ·角质酶的制备及分子改造 | 第17-19页 |
| ·角质酶的基因及克隆表达 | 第17-18页 |
| ·角质酶的分子改造 | 第18-19页 |
| ·角质酶的生产 | 第19页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·立项依据及研究意义 | 第19-20页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第20页 |
| 参考文献 | 第20-26页 |
| 第二章 T. fusca 角质酶的分离纯化 | 第26-37页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·培养基和培养条件 | 第27页 |
| ·分析方法 | 第27-28页 |
| ·T. fusca pNPB 水解酶的纯化 | 第28页 |
| ·F. solani pisi 角质酶的纯化 | 第28-29页 |
| ·角质的制备 | 第29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-35页 |
| ·T. fusca 角质酶的诱导制备 | 第29页 |
| ·pNPB 水解酶的分离纯化 | 第29-32页 |
| ·pNPB 水解酶角质水解能力研究 | 第32-35页 |
| ·本章小结 | 第35页 |
| 参考文献 | 第35-37页 |
| 第三章 T. fusca角质酶基因的鉴定及克隆表达 | 第37-56页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·试剂和仪器 | 第37-38页 |
| ·培养基和培养条件 | 第38页 |
| ·分析方法 | 第38页 |
| ·肽指纹图谱测序 | 第38页 |
| ·N-端测序 | 第38页 |
| ·总DNA 的提取 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第39页 |
| ·PCR 产物回收 | 第39-40页 |
| ·载体连接 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第41页 |
| ·定点突变方法 | 第41-42页 |
| ·重组角质酶的纯化 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-54页 |
| ·肽指纹图谱鉴定T. fusca 角质酶基因 | 第42-45页 |
| ·T. fusca 角质酶的N-端测序 | 第45-46页 |
| ·Tfu_0882 和Tfu_0883 基因的克隆 | 第46-48页 |
| ·Tfu_0882 和Tfu_0883 基因在大肠杆菌中的表达 | 第48-51页 |
| ·重组Tfu_0882 和Tfu_0883 的分离纯化 | 第51-53页 |
| ·重组Tfu_0882 和Tfu_0883 角质水解能力研究 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-56页 |
| 第四章 重组T.fusca角质酶的高效分泌 | 第56-67页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-57页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·试剂和仪器 | 第56-57页 |
| ·培养基和培养条件 | 第57页 |
| ·分析方法 | 第57页 |
| ·周质蛋白的释放 | 第57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-64页 |
| ·重组Tfu_0883 的发酵过程研究 | 第57-58页 |
| ·IPTG 诱导浓度对重组大肠杆菌发酵生产重组Tfu_0883 的影响 | 第58-59页 |
| ·温度对重组大肠杆菌发酵生产重组Tfu_0883 的影响 | 第59-60页 |
| ·甘氨酸对重组Tfu_0883 分泌的影响 | 第60-62页 |
| ·表面活性剂对重组Tfu_0883 分泌的影响 | 第62-63页 |
| ·两阶段温度控制对重组Tfu_0883 分泌的影响 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第五章 重组T.fusca角质酶酶学性质研究 | 第67-82页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-70页 |
| ·角质酶 | 第67页 |
| ·试剂与仪器 | 第67-68页 |
| ·分析方法 | 第68-70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-79页 |
| ·角质酶分子量的测定 | 第70页 |
| ·重组角质酶的最适温度及温度稳定性 | 第70-71页 |
| ·重组角质酶的最适pH 及pH 稳定性 | 第71-72页 |
| ·重组角质酶的底物特异性研究 | 第72-74页 |
| ·重组角质酶的动力学分析 | 第74-75页 |
| ·重组角质酶的油-水界面特性 | 第75-76页 |
| ·金属离子对重组角质酶的影响 | 第76-77页 |
| ·表面活性剂对重组角质酶的影响 | 第77-79页 |
| ·重组角质酶在有机溶剂中的稳定性 | 第79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第六章 T.fusca 角质酶的催化机理初探及分子改造 | 第82-93页 |
| ·引言 | 第82页 |
| ·材料与方法 | 第82-83页 |
| ·菌株 | 第82页 |
| ·试剂与仪器 | 第82页 |
| ·培养基与培养条件 | 第82页 |
| ·分析方法 | 第82页 |
| ·定点突变方法 | 第82-83页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第83页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第83页 |
| ·抑制剂对角质酶的影响 | 第83页 |
| ·角质酶的协同作用研究 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-91页 |
| ·重组T. fusca 角质酶的结构模拟 | 第83-84页 |
| ·Tfu_0882 和Tfu_0883 催化角质水解机理初探 | 第84-87页 |
| ·Tfu_0883 的分子改造 | 第87-91页 |
| ·本章小结 | 第91页 |
| ·参考文献 | 第91-93页 |
| 结论 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第97页 |
