| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 研究综述 | 第11-21页 |
| 第一章 Akirin 基因研究进展 | 第11-21页 |
| ·Akirin 基因的发现背景及概述 | 第11-14页 |
| ·Akirin 基因在各物种的分布情况 | 第11-12页 |
| ·Akirin 基因的结构特点 | 第12-13页 |
| ·Akirin 基因在细胞中的定位 | 第13-14页 |
| ·Akirin 基因与果蝇天然免疫的关系 | 第14-16页 |
| ·Akirin 与Toll 信号通路的关系 | 第14-15页 |
| ·Akirin 基因与Imd 信号通路的关系 | 第15-16页 |
| ·Akirin 基因在哺乳动物体内参与到NF-κB 信号通路 | 第16-19页 |
| ·NF-κB 通路介绍 | 第16-18页 |
| ·Akirin 对NF-κB 通路的影响 | 第18-19页 |
| ·Akirin 基因的其它功能 | 第19页 |
| ·LPS 对细胞因子的激活作用 | 第19-20页 |
| ·IL-6 与IL-1 的生物学功能 | 第20-21页 |
| 试验部分 | 第21-39页 |
| 第二章 转染后阳性克隆筛选与亚细胞定位的研究 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·载体、细胞和菌种 | 第21页 |
| ·酶和试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-28页 |
| ·pEGFP-Akirin2 真核表达载体酶切鉴定、测序鉴定 | 第22页 |
| ·将鉴定过的pEGFP-Akirin2 质粒转化感受态大肠杆菌DH5α | 第22-23页 |
| ·阳性质粒的筛选与扩大培养 | 第23页 |
| ·重组质粒pEGFP-Akirin2 大量提取 | 第23-24页 |
| ·SUVEC 细胞培养 | 第24-25页 |
| ·重组pEGFP-Akirin2 质粒转染SUVEC 细胞 | 第25页 |
| ·新霉素（G418）最佳筛选浓度的确定 | 第25-26页 |
| ·G418 对转染细胞的加压筛选 | 第26页 |
| ·挑选稳定转染细胞单克隆株 | 第26页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白 | 第26-27页 |
| ·Akirin2 的亚细胞定位研究 | 第27-28页 |
| ·MTT 法测SUVEC 细胞增殖活性 | 第28页 |
| ·数据分析 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·pEGFP-Akirin2 双酶切鉴定和测序结果 | 第28-29页 |
| ·pEGFP-Akirin2 质粒浓度检测结果 | 第29页 |
| ·猪脐静脉血管内皮细胞形态观察 | 第29页 |
| ·转染后荧光倒置显微镜下观察细胞 | 第29-30页 |
| ·Hochesst3342 染色后观察Akirin2 的亚细胞定位 | 第30页 |
| ·倒置荧光显微镜下观察阳性克隆细胞 | 第30-31页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第31页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖活性 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第三章Akirin2 基因对细胞因子IL-1β和IL-6 mRNA 表达的影响 | 第33-39页 |
| ·材料和仪器 | 第33-34页 |
| ·细胞株 | 第33页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·实时定量PCR 引物的设计 | 第34页 |
| ·细胞培养 | 第34页 |
| ·细胞分组 | 第34页 |
| ·加入外源刺激物LPS | 第34页 |
| ·Trizol 法提取细胞总RNA | 第34-35页 |
| ·反转录PCR 体系和条件 | 第35页 |
| ·荧光实时定量PCR 反应体系和条件 | 第35页 |
| ·采取??Ct 法来分析各个基因的相对表达量 | 第35页 |
| ·数据统计 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·荧光定量检测在LPS 刺激下转染组IL-1β、IL-6mRNA 的相对表达量 | 第36-37页 |
| ·荧光实时定量PCR 检测NF-κB 的m RNA 相对表达量 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录 | 第45-49页 |
| 缩略词 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 个人简介 | 第51页 |
