新疆地区结核分枝杆菌临床分离株致病相关基因的筛选
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-27页 |
| 1 材料 | 第13-15页 |
| ·菌株样本 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·实验溶液配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·实验耗材 | 第15页 |
| 2 方法 | 第15-27页 |
| ·结核分枝杆菌的制备 | 第15-16页 |
| ·结核分枝杆菌菌株样本采集 | 第15页 |
| ·结核分枝杆菌培养 | 第15-16页 |
| ·结核分枝杆菌基因组DNA抽提 | 第16-17页 |
| ·抽提用品处理 | 第16页 |
| ·结核分枝杆菌菌株处理 | 第16页 |
| ·结核分枝杆菌基因组DNA抽提方法 | 第16-17页 |
| ·结核分枝杆菌基因组DNA | 第17页 |
| ·多重ＰＣＲ法鉴定结核分枝杆菌菌种 | 第17-18页 |
| ·设计引物 | 第17-18页 |
| ·按设计合成引物 | 第18页 |
| ·PCR 扩增 | 第18页 |
| ·扩增产物的分析 | 第18页 |
| ·Rsa I 酶切 | 第18页 |
| ·酶切 DNA 纯化 | 第18-19页 |
| ·接头连接 | 第19-20页 |
| ·接头连接效率检测 | 第20-21页 |
| ·双向抑制性差减杂交 | 第21-22页 |
| ·两轮PCR 富集 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·差异基因PCR 产物纯化 | 第23-24页 |
| ·差异基因与载体连接 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·差异基因连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第25页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第25页 |
| ·阳性转化子的 PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·阳性转化子的质粒抽提 | 第25-26页 |
| ·通用引物扩增目的片断 | 第26页 |
| ·测序 | 第26页 |
| ·生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 结果 | 第27-34页 |
| 1. 结核分枝杆菌基因组 DNA 抽提结果 | 第27页 |
| 2. 多重PCR鉴定结核分枝杆菌菌种结果 | 第27页 |
| 3. 结核分枝杆菌基因组酶切结果 | 第27-28页 |
| 4. 接头连接效率检测结果 | 第28页 |
| 5. 正反双相消减杂交结果 | 第28-29页 |
| 6. 蓝白斑筛选结果 | 第29页 |
| 7. 阳性转化子的 PCR 鉴定结果 | 第29-30页 |
| 8. 通用引物 PCR 扩增结果 | 第30页 |
| 9. 测序结果比对分析结果 | 第30-34页 |
| 讨论 | 第34-47页 |
| 1 结核分枝杆菌差异基因筛选的技术方法 | 第35-41页 |
| ·多重 PCR 对分枝杆菌鉴定的特异性 | 第35-36页 |
| ·抑制性消减杂交SSH技术与原理 | 第36-38页 |
| ·SSH 在本项研究中的运用 | 第38-40页 |
| ·结核分枝杆菌差异基因测序 | 第40-41页 |
| ·提高连接效率 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·提高转化效率. | 第41页 |
| 2 结核分枝杆菌差异基因功能分析 | 第41-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 文献综述 | 第50-62页 |
| 作者简历 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 导师评阅表 | 第64页 |
