| 目录 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 缩略表 | 第18-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-39页 |
| 1.核苷酸的用途 | 第19-20页 |
| 2.核苷酸的生产方法 | 第20-28页 |
| ·化学法生产核苷酸 | 第20-21页 |
| ·酶解法生产核苷酸 | 第21-23页 |
| ·微生物发酵法生产核苷酸 | 第23-26页 |
| ·生物催化法生产核苷酸 | 第26-28页 |
| 3.尿嘧啶核苷酸(UMP)的生化性质及生物催化法合成 | 第28-30页 |
| ·UMP的生化性质 | 第28页 |
| ·UMP的生物催化法合成 | 第28-30页 |
| 4.嘧啶核苷酸合成基因 | 第30-32页 |
| 5.乳清酸磷酸核糖转移酶 | 第32-39页 |
| ·OPRTase的生理意义及应用价值 | 第32-33页 |
| ·OPRTase的研究进展 | 第33-39页 |
| 第二章 核苷酸的检测 | 第39-45页 |
| 1.材料与方法 | 第39-41页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第39-40页 |
| ·分析方法 | 第40-41页 |
| 2.结果与讨论 | 第41-45页 |
| ·薄板层析法检测乳清酸和UMP | 第41-43页 |
| ·HPLC检测多种核苷及核苷酸 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 利用Corynebacterium ammoniagenes生物催化合成UMP | 第45-61页 |
| 1.材料与方法 | 第46-49页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第46-47页 |
| ·菌种,培养基及培养条件 | 第47页 |
| ·催化反应 | 第47-48页 |
| ·实验设计及统计学分析 | 第48-49页 |
| ·分析方法 | 第49页 |
| 2 结果与讨论 | 第49-60页 |
| ·培养条件对C.ammoniagenes菌体生长及细胞转化能力的影响 | 第49-51页 |
| ·催化反应液的组成 | 第51-53页 |
| ·催化反应体系中的主要影响因素 | 第53-55页 |
| ·催化反应的优化 | 第55-58页 |
| ·最适条件下UMP的合成 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 3 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 Corynebacterium ammoniagenes pyrE基因的克隆及表达 | 第61-79页 |
| 1.材料与方法 | 第62-71页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第62-64页 |
| ·菌种,质粒及引物 | 第64页 |
| ·培养基和培养方法 | 第64-65页 |
| ·DNA操作技术 | 第65-66页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第66-67页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第67-68页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第68页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第68-69页 |
| ·Southern杂交和原位杂交 | 第69-70页 |
| ·C.ammoniagenes ATCC 6872 pyrE基因的克隆 | 第70页 |
| ·表达质粒的构建 | 第70-71页 |
| 2.结果与讨论 | 第71-77页 |
| ·C.ammoniagenes ATCC 6872 pyrE基因的克隆 | 第71-74页 |
| ·C.ammoniagenes ATCC 6872 pyrE基因的序列比对 | 第74-76页 |
| ·C.ammoniagenes pyrE基因的表达 | 第76-77页 |
| 3 小结 | 第77-79页 |
| 第五章 Corynebacterium ammoniagenes OPRTase的纯化及性质 | 第79-93页 |
| 1.材料与方法 | 第80-81页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第80页 |
| ·菌种及培养方法 | 第80页 |
| ·酶纯化方法 | 第80-81页 |
| ·酶活分析方法 | 第81页 |
| ·其它方法 | 第81页 |
| 2 结果与讨论 | 第81-90页 |
| ·C.ammoniagenes OPRTase的纯化 | 第81-83页 |
| ·纯化的OPRTase的性质 | 第83-87页 |
| ·C.ammoniagenes ATCC 6872 OPRTase的分子量 | 第83页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第83-85页 |
| ·温度对OPRTase的影响 | 第85-86页 |
| ·pH对酶活的影响 | 第86页 |
| ·C.ammoniagenes OPRTase的动力学参数 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| 3 小结 | 第90-93页 |
| 第六章 pyrE基因的表达调控 | 第93-105页 |
| 1.材料与方法 | 第95-98页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第95-96页 |
| ·菌种及培养 | 第96页 |
| ·酶活分析方法 | 第96-97页 |
| ·电转化方法 | 第97-98页 |
| ·其它方法 | 第98页 |
| 2 结果与讨论 | 第98-103页 |
| ·C.ammoniagenes中OPRTase的表达调控 | 第98页 |
| ·p26的表达及序列分析 | 第98-100页 |
| ·p26在大肠杆菌转化子中的表达调控 | 第100-101页 |
| ·p26在棒杆菌中的表达调控 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-103页 |
| 3 小结 | 第103-105页 |
| 第七章 组成型OPRTase表达质粒的构建及其在UMP生产中的应用 | 第105-115页 |
| 1.材料与方法 | 第106-110页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第106-108页 |
| ·培养基和培养条件 | 第108页 |
| ·基因组提取及DNA操作 | 第108-109页 |
| ·PCR及重组PCR | 第109-110页 |
| ·电转化方法 | 第110页 |
| ·酶活检测 | 第110页 |
| 2 结果与讨论 | 第110-114页 |
| ·IJ59的克隆 | 第110-111页 |
| ·IJ59和p26的重组PCR及pXMJIE重组质粒的构建 | 第111-112页 |
| ·pXMJIE在E.coli DH5α中的表达 | 第112-113页 |
| ·讨论 | 第113-114页 |
| 3 小结 | 第114-115页 |
| 结语 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 论文发表 | 第131-146页 |
