| 前言 | 第1-22页 |
| 1． 果实成熟的生理生化 | 第9-11页 |
| 2． 果实成熟衰老的基因调控 | 第11-17页 |
| 2．1 果实成熟衰老的分子生物学基础 | 第11-14页 |
| 2．1．1 乙烯生成有关的酶及基因 | 第11-14页 |
| 2．1．2 细胞壁结构相关的酶及基因 | 第14页 |
| 2．2 果实成熟调控的研究进展 | 第14-17页 |
| 2．2．1 细胞壁降解的反义基因抑制 | 第15页 |
| 2．2．2 抑制乙烯的合成延缓果实的成熟 | 第15-16页 |
| 2．2．3 色素生物合成反义基因工程研究进展 | 第16-17页 |
| 3． 植物Annexin基因研究进展 | 第17-21页 |
| 3．1 Annexin研究概况 | 第17-19页 |
| 3．2 植物Annexin研究进展 | 第19-21页 |
| 3．3 草莓果实中Annexin研究进展 | 第21页 |
| 4． 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第一部分 草莓果实特异表达基因（annfaf）cDNA的克隆及序列分析 | 第22-35页 |
| 1． 材料与方法 | 第22-24页 |
| 1．1 材料 | 第22-23页 |
| 1．1．1 植物材料 | 第22页 |
| 1．1．2 菌种及质粒 | 第22页 |
| 1．1．3 酶及试剂 | 第22-23页 |
| 1．1．4 引物 | 第23页 |
| 1．1．5 仪器 | 第23页 |
| 1．2 方法 | 第23-24页 |
| 1．2．1 总RNA的提取 | 第23页 |
| 1．2．2 annfaf cDNA的合成 | 第23页 |
| 1．2．3 annfaf cDNA的克隆 | 第23页 |
| 1．2．4 DNA序列测定测定及分析 | 第23-24页 |
| 2． 结果与分析 | 第24-34页 |
| 2．1 RNA完整性检测 | 第24-25页 |
| 2．2 annfaf cDNA的RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2．3 annfaf cDNA的克隆及酶切鉴定 | 第26页 |
| 2．4 annfaf cDNA编码氨基酸特征分析 | 第26-34页 |
| 2．4．1 annfaf cDNA编码氨基酸基本特征 | 第26页 |
| 2．4．2 annfaf cDNA编码氨基酸与其它植物Annexin间同源性分析 | 第26-27页 |
| 2．4．3 annfaf cDNA编码氨基酸结构基元分析 | 第27-28页 |
| 2．4．4 annfaf cDNA编码蛋白疏水性及二级结构和三级结构预测 | 第28-30页 |
| 2．4．5 annfaf cDNA编码蛋白N端特征分析 | 第30-34页 |
| 3． 讨论 | 第34-35页 |
| 第二部分 草莓果实特异表达基因（annfaf）在大肠杆菌中的表达、抗血清制备及检测 | 第35-46页 |
| 1． 大肠杆菌表达系统和表达形式 | 第35-36页 |
| 2． 大肠杆菌pET30（a）融合表达体系 | 第36-45页 |
| 1． 材料与方法 | 第37-41页 |
| 1．1 材料 | 第37-38页 |
| 1．1．1 质粒和受体菌 | 第37页 |
| 1．1．2 酶及试剂 | 第37页 |
| 1．1．3 仪器 | 第37-38页 |
| 1．2 方法 | 第38-41页 |
| 1．2．1 annfaf基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第38页 |
| 1．2．2 Annfaf蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第38页 |
| 1．2．3 电泳凝胶数字图像定量分析 | 第38页 |
| 1．2．4 Annfaf抗血清的制备 | 第38页 |
| 1．2．5 ELISA测定 | 第38页 |
| 1．2．6 Western印迹 | 第38-41页 |
| 2． 结果与分析 | 第41-45页 |
| 2．1 annfaf基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第41页 |
| 2．2 Annfaf蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2．2．1 Annfaf融合蛋白的表达 | 第41页 |
| 2．2．2 Annfaf非融合蛋白的表达及纯化 | 第41-42页 |
| 2．3 蛋白表达的影响因素 | 第42-43页 |
| 2．3．1 诱导时间的影响 | 第42页 |
| 2．3．2． 诱导温度对基因表达的影响 | 第42页 |
| 2．3．3． 利福霉素的影响 | 第42-43页 |
| 2．4 Annfaf抗血清检测 | 第43页 |
| 2．5 Western blot | 第43-45页 |
| 3． 讨论 | 第45-46页 |
| 第三部分 草莓果实特异表达蛋白（Annfaf）反义融合基因的构建及遗传转化的研究 | 第46-57页 |
| 1． 材料与方法 | 第46-51页 |
| 1．1 材料 | 第46-47页 |
| 1．1．1 植物材料 | 第46页 |
| 1．1．2 菌种和质粒 | 第46页 |
| 1．1．3 酶及试剂 | 第46-47页 |
| 1．1．4 引物 | 第47页 |
| 1．1．5 仪器 | 第47页 |
| 1．2 方法 | 第47-51页 |
| 1．2．1 annfaf cDNA的克隆 | 第47页 |
| 1．2．2 annaf反义基因植物表达载体的构建 | 第47页 |
| 1．2．3 植物转化工程菌的获得 | 第47-48页 |
| 1．2．4 无菌苗继代培养 | 第48-50页 |
| 1．2．5 外源基因转化 | 第50页 |
| 1．2．6 转基因植株的PCR分析 | 第50-51页 |
| 2． 结果与分析 | 第51-55页 |
| 2．1 annfaf cDNA的克隆及酶切鉴定 | 第51页 |
| 2．2 annfaf反义基因重组双元质粒的PCR鉴定 | 第51-53页 |
| 2．3 植物表达重组质粒的酶切鉴定 | 第53页 |
| 2．4 草莓转化芽的获得 | 第53-54页 |
| 2．5 草莓转化芽的Kan抗性分析 | 第54-55页 |
| 2．6 转基因草莓的PCR鉴定 | 第55页 |
| 3． 讨论 | 第55-57页 |
| 3．1 工程菌菌株对转化效率的影响 | 第55-56页 |
| 3．2 植物材料基因型、生理状态对遗传转化的影响 | 第56-57页 |
| 第四部分 实验技术与方法汇总 | 第57-73页 |
| 1． 草莓（Fragarla×ananassa Duch．）、菌种、质粒、分子标记和试剂 | 第57页 |
| 1．1 草莓品种：All Star、新世纪1号 | 第57页 |
| 1．2 菌种：大肠杆菌（E．coli）JMl09、BL21（DE3），根癌农杆菌（Agribecterium tumefaciens）EHA105为本室保存 | 第57页 |
| 2． 菌体培养与保存 | 第57-58页 |
| 3． 植物培养基配制 | 第58-59页 |
| 4． 质粒提取 | 第59-61页 |
| 5． 质粒的酶切及连接 | 第61页 |
| 6． 核酸的电泳 | 第61-62页 |
| 7． DNA片段的回收 | 第62页 |
| 8． 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第62-64页 |
| 9． 根癌农杆菌（A．tumefaciens）EHA105感受态细胞的制备及转化 | 第64页 |
| 10． 细菌重组质粒菌落的鉴定 | 第64-65页 |
| 11． DNA序列分析 | 第65页 |
| 12． 草莓果实RNA的提取 | 第65-66页 |
| 13． 植物基因组DNA的提取 | 第66-67页 |
| 14． 超声裂解细胞壁 | 第67-68页 |
| 15． SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第68-70页 |
| 15．4．1 考马斯亮蓝染色： | 第69-70页 |
| 15．4．2 银染： | 第70页 |
| 16． 动物免疫血清制备 | 第70-71页 |
| 17． ELISA分析 | 第71页 |
| 18． Westem blotting分析 | 第71-73页 |
| 结语 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
