| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| G 蛋白及MAPK信号途径在真菌中的研究进展 | 第18-38页 |
| ·异三聚体G蛋白信号途径研究进展 | 第18-23页 |
| ·异三聚体G蛋白信号途径概述 | 第18-20页 |
| ·G蛋白信号途径在Saccharomyces cerevisiae等其他真菌中的研究进展 | 第20-22页 |
| ·G蛋白信号途径在稻瘟病菌中的研究进展 | 第22-23页 |
| ·MAPK信号途径概述 | 第23-28页 |
| ·MAPK级联信号途径在S.cerevisiae等其他真菌中的研究进展 | 第24-26页 |
| ·MAPK信号途径在稻瘟病菌致病过程中的研究进展 | 第26-28页 |
| ·展望 | 第28页 |
| 参考文献 | 第28-38页 |
| 第一章 G蛋白调控因子MoRGS基因在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能分析 | 第38-78页 |
| 1 材料与方法 | 第41-46页 |
| ·供试菌株 | 第41页 |
| ·酵母菌株培养条件 | 第41页 |
| ·MoRGS基因的克隆及蛋白序列分析 | 第41-42页 |
| ·MoRGS基因的克隆及测序 | 第41页 |
| ·MoRgs蛋白序列保守结构域分析 | 第41-42页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第42页 |
| ·酵母双杂交 | 第42页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第42页 |
| ·酵母双杂交LacZ活性检测 | 第42页 |
| ·co-IP分析 | 第42-43页 |
| ·MoRGS基因敲除突变体的获得 | 第43-44页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第43页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第43-44页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第44页 |
| ·敲除突变体的表型观测 | 第44页 |
| ·突变体的菌落形态和营养生长测定 | 第44页 |
| ·突变体的自溶现象观察和菌丝疏水性测定 | 第44页 |
| ·突变体的产孢量及孢子萌发提前分析 | 第44页 |
| ·突变体的胞内cAMP浓度测定 | 第44-45页 |
| ·突变体的附着胞形成和致病性分析 | 第45页 |
| ·突变体的水稻叶鞘侵染观察 | 第45页 |
| ·突变体的有性生殖测定 | 第45页 |
| ·突变体的胞外漆酶及过氧化酶活性分析 | 第45页 |
| ·MoRGS基因的定位分析 | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第46页 |
| 2 结果分析 | 第46-68页 |
| ·稻瘟病菌编码8个RGS蛋白 | 第46-47页 |
| ·MoRGS基因在不同生活史阶段的表达分析 | 第47-48页 |
| ·RGS蛋白与Ga亚基相互作用 | 第48-50页 |
| ·MoRGS基因的敲除及突变体的获得 | 第50-55页 |
| ·MoRGS1和MoRGS4调控营养生长, MoRGS1参与调控细胞壁的完整性 | 第55-57页 |
| ·MoRGS1和MoRGS4参与气生菌丝的疏水性 | 第57-58页 |
| ·RGS蛋白调控胞内的cAMP水平 | 第58-59页 |
| ·MoRGS基因参与分生孢子梗和分生孢子的产生 | 第59-60页 |
| ·MoRGS基因参与芽管的生长和附着胞的分化 | 第60-61页 |
| ·MoRGS1基因参与附着胞的形成和成熟过程 | 第61-62页 |
| ·MoRGS1、MoRGS3、MoRGS4和MoRGS7参与稻瘟病菌的致病过程 | 第62-63页 |
| ·MoRGS基因调控致病因子Pth1l的转录 | 第63-64页 |
| ·MoRGS1和MoRGS4参与有性生殖 | 第64-65页 |
| ·MoRGS4调控胞外漆酶和胞外过氧化物酶的活性 | 第65-67页 |
| ·MoRGS基因的表达和定位分析 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 第二章 腺苷酸环化酶相关基因MoCAP1在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能分析 | 第78-102页 |
| 1 材料与方法 | 第81-85页 |
| ·供试菌株 | 第81页 |
| ·酵母菌株培养条件 | 第81-82页 |
| ·MoCap1的蛋白序列分析 | 第82页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第82页 |
| ·酵母双杂交 | 第82页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第82页 |
| ·酵母双杂交LacZ活性检测 | 第82页 |
| ·酵母互补分析 | 第82页 |
| ·敲除突变体的获得 | 第82-83页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第82-83页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第83页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第83页 |
| ·生物学表型分析 | 第83-84页 |
| ·菌落形态和营养生长测定 | 第83页 |
| ·产孢量分析 | 第83-84页 |
| ·附着胞形成和致病性测定 | 第84页 |
| ·胞内cAMP浓度测定 | 第84页 |
| ·水稻叶鞘侵染观察 | 第84页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第84-85页 |
| 2 结果分析 | 第85-93页 |
| ·MoCap1氨基酸序列结构特征分析 | 第85-86页 |
| ·MoCAP1是与Mac1相互作用的基因 | 第86页 |
| ·MoCAP1是S.cerevisiae SRV2的同源基因 | 第86-87页 |
| ·MoCAP1基因的敲除突变体和互补菌株的获得 | 第87-88页 |
| ·MoCAP1参与稻瘟病菌的营养生长和产孢过程 | 第88-90页 |
| ·MoCAP1参与分生孢子芽管的分化和附着胞的形态建成 | 第90页 |
| ·MoCAP1参与调控Ras和Mac1的表达及胞内的cAMP水平 | 第90-92页 |
| ·加入外源的cAMP可部分抑制AMocap1突变体的表型缺陷 | 第92页 |
| ·MoCAP1参与稻瘟病菌的致病过程 | 第92-93页 |
| ·MoCAP1参与附着胞侵入和侵染菌丝扩展过程 | 第93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 第三章 磷酸二酯酶基因MoPDEL和MoPDEH在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能分析 | 第102-140页 |
| 1 材料与方法 | 第105-109页 |
| ·供试菌株 | 第105页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH基因的克隆及蛋白序列分析 | 第105页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH基因的克隆及测序 | 第105页 |
| ·MoPdeL和MoPdeH蛋白序列保守结构域分析 | 第105页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第105-106页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH基因敲除突变体的获得 | 第106-107页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第106页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第106-107页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第107页 |
| ·敲除突变体的表型观测 | 第107-108页 |
| ·突变体的菌落形态和营养生长测定 | 第107页 |
| ·突变体的分生孢子形态观察、产孢量测定和附着胞形成试验 | 第107页 |
| ·突变体的自溶现象观察和菌丝疏水性测定 | 第107-108页 |
| ·MPG1过表达载体的构建及转化子验证 | 第108页 |
| ·胞内cAMP浓度测定 | 第108页 |
| ·致病性分析 | 第108页 |
| ·水稻叶鞘侵染观察 | 第108页 |
| ·胞外漆酶活性分析 | 第108-109页 |
| ·Microarray数据分析 | 第109页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第109页 |
| 2 结果分析 | 第109-129页 |
| ·MoPdeL和MoPdeH氨基酸序列结构特征分析 | 第109-110页 |
| ·MoPDEH在与侵染相关阶段高度表达 | 第110-111页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH基因的敲除及双基因敲除突变体和互补菌株的获得 | 第111-114页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH参与分生孢子形态建成和无性繁殖过程 | 第114-116页 |
| ·MoPDEH参与细胞壁的完整性但不参与营养生长 | 第116-117页 |
| ·MoPDEH参与气生菌丝的疏水性 | 第117-118页 |
| ·MoPdeL和MoPdeH均参与调控胞内cAMP水平 | 第118-119页 |
| ·MoPdeH参与在附着胞形成过程中对表面信号的识别 | 第119-120页 |
| ·MoPdeH参与稻瘟病菌的致病过程并诱导寄主防卫反应的产生 | 第120-123页 |
| ·过表达MPG1能部分互补AMopdeH突变体的菌丝疏水性和致病性缺陷 | 第123-124页 |
| ·MoPdeL和MoPdeH均参与调控胞外漆酶活性 | 第124-125页 |
| ·MoPDEL和MoPDEH所调控的基因分析 | 第125-126页 |
| ·MoPdeH调控一些致病相关基因的表达 | 第126-127页 |
| ·MoPDEH调控的基因对附着胞形成及致病性的影响 | 第127-129页 |
| 3 讨论 | 第129-132页 |
| 参考文献 | 第132-140页 |
| 第四章 Pmk1互作基因在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能分析 | 第140-164页 |
| 1 材料与方法 | 第143-146页 |
| ·供试菌株 | 第143页 |
| ·酵母菌株培养条件 | 第143页 |
| ·酵母双杂交文库的构建和筛选 | 第143页 |
| ·co-IP分析 | 第143-144页 |
| ·载体的构建和转化子的验证 | 第143页 |
| ·Western blot分析 | 第143-144页 |
| ·Pic1和Pic5的蛋白序列结构分析 | 第144页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第144页 |
| ·PIC1和PIC5基因敲除突变体的获得 | 第144-145页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第144页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第144-145页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第145页 |
| ·敲除突变体的表型观测 | 第145-146页 |
| ·突变体的菌落形态和营养生长测定 | 第145页 |
| ·突变体的产孢量分析 | 第145页 |
| ·突变体的附着胞形成和致病性测定 | 第145页 |
| ·突变体的水稻叶鞘侵染观察 | 第145-146页 |
| ·PIC1和PIC5的定位分析 | 第146页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第146页 |
| 2 结果分析 | 第146-157页 |
| ·酵母双杂交文库的建立 | 第146页 |
| ·PIC1和PIC5的编码蛋白与Pmk1相互作用 | 第146-149页 |
| ·PIC1和PIC5基因的敲除 | 第149-151页 |
| ·PIC1影响分生孢子的产生但不参与生长和致病过程 | 第151-152页 |
| ·PIC5参与菌落形态、产孢和附着胞分化 | 第152-153页 |
| ·PIC5参与致病过程 | 第153页 |
| ·PIC5在附着胞侵入过程中具有重要作用 | 第153-154页 |
| ·PIC1和PIC5的表达及其编码蛋白的细胞定位分析 | 第154-157页 |
| 3 讨论 | 第157-159页 |
| 参考文献 | 第159-164页 |
| 第五章 Mst50互作基因在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能分析 | 第164-186页 |
| 1 材料与方法 | 第166-170页 |
| ·供试菌株 | 第166-167页 |
| ·酵母菌株培养条件 | 第167页 |
| ·酵母双杂交文库的筛选 | 第167页 |
| ·co-IP分析 | 第167页 |
| ·载体的构建和转化子的验证 | 第167页 |
| ·Western blot分析 | 第167页 |
| ·Mic5和Mic8的蛋白序列结构分析 | 第167页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第167-168页 |
| ·MIC1和MIC5基因敲除突变体的获得 | 第168页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第168页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第168页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第168页 |
| ·敲除突变体的表型观测 | 第168-169页 |
| ·突变体的菌落形态和营养生长测定 | 第168-169页 |
| ·突变体的产孢量分析 | 第169页 |
| ·突变体的附着胞形成和致病性测定 | 第169页 |
| ·突变体的水稻叶鞘侵染观察 | 第169页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第169-170页 |
| 2 结果分析 | 第170-181页 |
| ·Mst50互作蛋白的筛选 | 第170-171页 |
| ·Mic5、Mic8、Mic27及Mic29是与Mst50互作的蛋白 | 第171-172页 |
| ·Mic5和Mic8的氨基酸序列结构特征分析 | 第172-174页 |
| ·MIC8是S.cerevisiae VPS68的同源基因 | 第174页 |
| ·MIC5和MIC8基因敲除突变体的获得 | 第174-175页 |
| ·MIC5不参与稻瘟病菌的生长、产孢、附着胞形成及致病过程 | 第175-176页 |
| ·MIC8参与菌丝的营养生长和分生孢子的产生 | 第176-177页 |
| ·MIC8参与对外界胁迫的应答 | 第177-178页 |
| ·MIC8参与致病过程和侵染菌丝的生长 | 第178-180页 |
| ·Mic8的表达和定位分析 | 第180-181页 |
| 3 讨论 | 第181-182页 |
| 参考文献 | 第182-186页 |
| 全文总结 | 第186-188页 |
| 本论文创新点 | 第188-190页 |
| 附录1 | 第190-210页 |
| 1 材料与方法 | 第192-195页 |
| ·供试菌株 | 第192页 |
| ·MoCRZ1基因的克隆及蛋白序列分析 | 第192-193页 |
| ·MoCRZ1基因的克隆及测序 | 第192-193页 |
| ·MoCrz1蛋白序列保守结构域分析 | 第193页 |
| ·稻瘟病菌菌丝体DNA、RNA的提取及cDNA的合成 | 第193页 |
| ·酵母互补分析 | 第193页 |
| ·MoCRZ1基因敲除突变体的获得 | 第193-194页 |
| ·敲除载体的构建及原生质体转化 | 第193-194页 |
| ·敲除突变体的筛选及验证 | 第194页 |
| ·敲除突变体的互补验证 | 第194页 |
| ·敲除突变体的表型观测 | 第194-195页 |
| ·耐胁迫测定 | 第194-195页 |
| ·产胞量和附着胞形成观察 | 第195页 |
| ·致病性分析及洋葱表皮侵入观察 | 第195页 |
| ·原生质体释放测定 | 第195页 |
| 2 结果分析 | 第195-204页 |
| ·MoCrz1的氨基酸序列结构特征分析 | 第195-196页 |
| ·MoCRZ1是S.cerevisiae CRZ1的同源基因 | 第196-197页 |
| ·MoCRZ1基因敲除突变体的获得 | 第197-198页 |
| ·MoCRZ1参与对Ca~(2+)离子的应答 | 第198-199页 |
| ·MoCRZ1参与分生孢子的产生和附着胞的分化 | 第199-200页 |
| ·MoCRZ1参与稻瘟病菌的致病过程 | 第200-201页 |
| ·MoCRZ1参与附着胞的脂类代谢过程 | 第201-202页 |
| ·MoCRZ1参与膨压的产生和细胞壁完整性 | 第202-203页 |
| ·MoCRZ1的表达和定位分析 | 第203-204页 |
| 3 讨论 | 第204-206页 |
| 参考文献 | 第206-210页 |
| 附表1 | 第210-212页 |
| 附表2 | 第212-218页 |
| 附表3 | 第218-224页 |
| 附表4 | 第224-229页 |
| 附表5 | 第229-240页 |
| 附表6 | 第240-246页 |
| 攻读博士学位期间已发表和拟发表的研究论文 | 第246-248页 |
| 致谢 | 第248-249页 |
