| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 赤拟谷盗 | 第12-14页 |
| ·赤拟谷盗的发生与危害 | 第12-13页 |
| ·赤拟谷盗的抗性问题 | 第13-14页 |
| 2 细胞色素P450 | 第14-21页 |
| ·细胞色素P450概述 | 第14-15页 |
| ·细胞色素P450的命名 | 第15页 |
| ·细胞色素P450的分布 | 第15-16页 |
| ·细胞色素P450的多样性 | 第16-17页 |
| ·细胞色素P450的结构特征 | 第17页 |
| ·细胞色素P450的功能 | 第17-18页 |
| ·昆虫细胞色素P450与害虫抗药性 | 第18-20页 |
| ·细胞色素P450介导的昆虫抗药性的分子基础 | 第20-21页 |
| 3 P450基因克隆策略 | 第21-24页 |
| ·分离纯化P450蛋白,制备抗体以筛选cDNA表达文库 | 第21页 |
| ·纯化P450蛋白,测定部分氨基酸序列,反推导成核苷酸序列设计简并引物筛选 | 第21-22页 |
| ·用已知的昆虫P450基因为探针筛选 | 第22页 |
| ·PCR和RT-PCR克隆策略 | 第22页 |
| ·利用RACE方法克隆全长P450基因 | 第22-23页 |
| ·利用已完成全基因组测序物种基因组序列预测P450基因并设计引物克隆全长基因 | 第23-24页 |
| 第二章 赤拟谷盗细胞色素P450基因片段的克隆 | 第24-38页 |
| 1 试验材料 | 第24-26页 |
| ·饲料的处理与配制 | 第24页 |
| ·供试昆虫及饲养条件 | 第24页 |
| ·主要使用试剂 | 第24-25页 |
| ·主要使用仪器 | 第25-26页 |
| ·培养基的制备 | 第26页 |
| ·常用储备液及抽提液的制备 | 第26页 |
| 2 赤拟谷盗P450 cDNA第一链的合成 | 第26-31页 |
| ·总RNA提取 | 第26-27页 |
| ·RNA反转录 | 第27页 |
| ·P450基因片断的扩增 | 第27-28页 |
| ·目的片段的克隆和测序 | 第28-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-37页 |
| ·赤拟谷盗总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·P450基因片断扩增结果 | 第32-33页 |
| ·P450基因片段序列分析 | 第33-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 赤拟谷盗P450 cDNA 3'端序列的克隆及分析 | 第38-48页 |
| 1 试验材料 | 第38页 |
| 2 赤拟谷盗P450 cDNA的3'RACE | 第38-42页 |
| ·赤拟谷盗总RNA的提取 | 第38页 |
| ·3'RACE特异引物设计 | 第38-39页 |
| ·赤拟谷盗P450基因cDNA 3'端序列的扩增 | 第39-42页 |
| 3 赤拟谷盗P450 cDNA 3'端序列分析 | 第42-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 赤拟谷盗P450 cDNA 5'端序列的克隆及分析 | 第48-58页 |
| 1 试验材料 | 第48页 |
| 2 赤拟谷盗P450 cDNA的5'RACE | 第48-53页 |
| ·赤拟谷盗总RNA的提取 | 第48页 |
| ·5'RACE特异引物设计 | 第48-49页 |
| ·扩增P450 cDNA 5'端序列第一链cDNA的合成(5'-RACE-Ready cDNA) | 第49页 |
| ·cDNA 5'末端的快速扩增 | 第49-50页 |
| ·P450 cDNA 5'端扩增片段电泳图 | 第50-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·片段13的5'端的结果与分析 | 第53-55页 |
| ·片段14的5'端的结果与分析 | 第55-56页 |
| ·片段15的5'端的结果与分析 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 赤拟谷盗CYP345D3 cDNA全长的扩增 | 第58-74页 |
| 1 材料与方法 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-71页 |
| ·赤拟谷盗P450 cDNA全长扩增结果 | 第58-59页 |
| ·CYP345D3核苷酸及其ORF推导的氨基酸序列的基本信息 | 第59-61页 |
| ·同源性分析 | 第61页 |
| ·CYP345D3与其他昆虫的P450氨基酸序列比对分析 | 第61-70页 |
| ·CYP345D3的分子进化树 | 第70页 |
| ·CYP345D3的蛋白同源模拟 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-72页 |
| 4 研究展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录A 缩略词 | 第84-86页 |
| 附录B | 第86-88页 |
| 附录C 在读期间发表的论文 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
