| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-32页 |
| 1 稻瘟病菌及其致病性 | 第14-19页 |
| ·稻瘟病菌与稻瘟病 | 第14-15页 |
| ·稻瘟病菌的侵染过程 | 第15-19页 |
| ·分生孢子的吸附 | 第15-16页 |
| ·附着胞形成与侵入寄主 | 第16-18页 |
| ·稻瘟病菌在寄主中的定植 | 第18-19页 |
| 2 参与稻瘟病菌侵染过程中的信号转导途径 | 第19-26页 |
| ·cAMP信号转导途径 | 第20-21页 |
| ·MAPK信号途径 | 第21-23页 |
| ·Ca~(2+)信号途径 | 第23-26页 |
| 3 CaMK的在真菌中的作用研究进展 | 第26-32页 |
| ·蛋白激酶与CaMK | 第26-27页 |
| ·CaMK的种类和功能 | 第27-28页 |
| ·CaMK的结构和生化特性 | 第28-30页 |
| ·真菌中CaMK研究进展 | 第30-32页 |
| 第二部分 研究报告 | 第32-110页 |
| 第一章 CaMK基因的克隆及拷贝数验证 | 第32-61页 |
| 一 实验材料及实验仪器 | 第32-33页 |
| 1 菌株和质粒 | 第32页 |
| 2 试剂和培养基 | 第32-33页 |
| 3 实验仪器 | 第33页 |
| 二 实验方法 | 第33-42页 |
| 三 结果分析 | 第42-55页 |
| 1 稻瘟病菌菌丝体总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2 RT-PCR | 第43页 |
| 3 检测MgCaMK1/MgCaMK2的cDNA是否去除内含子 | 第43-44页 |
| 4 MgCaMK1/MgCaMK2连接pUCm-T载体后的菌体PCR验证 | 第44页 |
| 5 MgCaMK1/MgCaMK2基因测序结果 | 第44-47页 |
| 6 MgCaMK与其它物种CaMK的氨基酸序列分析 | 第47-51页 |
| 7 不同物种CaMK的进化树分析 | 第51-52页 |
| 8 稻瘟病菌MgCaMK1/MgCaMK2基因拷贝数验证结果 | 第52-55页 |
| 四 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 第二章 稻瘟病菌CaMK基因的表达研究 | 第61-88页 |
| 第一节 利用真核表达系统表达CaMK基因 | 第61-75页 |
| 一 实验材料和实验仪器 | 第61-63页 |
| 1 菌株和质粒 | 第61页 |
| 2 实验试剂和培养基 | 第61-63页 |
| 3 实验仪器 | 第63页 |
| 二 实验方法 | 第63-69页 |
| 三 结果分析 | 第69-73页 |
| 1 MgCaMK1/MgCaMK2基因的亚克隆 | 第69-70页 |
| 2 pESP-MgCaMK1和pESP-MgCaMK2表达载体的验证 | 第70-71页 |
| 3 pESP-MgCaMK1/pESP-MgCaMK2表达载体示意图 | 第71-72页 |
| 4 酵母中的表达载体回转DH5α细胞后的菌体PCR验证 | 第72页 |
| 5 融合蛋白GST-MgCaMK1和GST-MgCaMK2的诱导表达 | 第72-73页 |
| 四 讨论 | 第73-75页 |
| 第二节 稻瘟病菌CaMK基因的原核表达 | 第75-88页 |
| 一 实验材料及仪器 | 第75-76页 |
| 1 菌株和质粒 | 第75页 |
| 2 实验试剂和培养基 | 第75-76页 |
| 3 实验仪器 | 第76页 |
| 二 实验方法 | 第76-80页 |
| 三 结果分析 | 第80-86页 |
| 1 MgCaMK1/MgCaMK2基因的亚克隆 | 第80页 |
| 2 pET32a-MgCaMK1/pET32a-MgCaMK2表达载体的验证 | 第80-82页 |
| 3 表达载体转化BL21表达菌株的PCR验证 | 第82-83页 |
| 4 诱导剂IPTG浓度对Trx-MgCaMK1和Trx-MgCaMK2融合蛋白表达量的影响 | 第83-84页 |
| 5 温度对Trx-MgCaMK1和Trx-MgCaMK2可溶性蛋白的影响 | 第84-85页 |
| 6 Trx-MgCaMK1和Trx-MgCaMK2融合蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| 四 讨论 | 第86-88页 |
| 第三章 MgCaMK1和MgCaMK2的激酶活性检测 | 第88-110页 |
| 第一节 稻瘟病菌钙调素(MgCaM)的制备 | 第88-101页 |
| 一 实验材料 | 第88-89页 |
| 1 菌株和质粒 | 第88页 |
| 2 实验试剂和培养基 | 第88-89页 |
| 3 实验仪器 | 第89页 |
| 二 实验方法 | 第89-92页 |
| 三 结果分析 | 第92-98页 |
| 1 稻瘟病菌MgCaM基因的亚克隆 | 第92页 |
| 2 pET32a-MgCaM和pET28b-MgCaM表达载体的验证 | 第92-94页 |
| 3 Trx-MgCaM和MgCaM诱导时间的确定 | 第94-95页 |
| 4 诱导的Trx-MgCaM和MgCaM的可溶性鉴定 | 第95-96页 |
| 5 Trx-MgCaM和MgCaM的纯化 | 第96-97页 |
| 6 Western bloting分析 | 第97页 |
| 7 稻瘟病菌钙调素Ca~(2+)依赖性的凝胶迁移 | 第97-98页 |
| 四 讨论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-101页 |
| 第二节 MgCaMK1和MgCaMK2的激酶活性检测 | 第101-110页 |
| 一 实验试剂及实验仪器 | 第101页 |
| 1 实验试剂 | 第101页 |
| 2 实验仪器 | 第101页 |
| 二 实验方法 | 第101-102页 |
| 三 实验结果 | 第102-107页 |
| 1 MgCaMK1的自身磷酸化活性检测 | 第102页 |
| 2 MgCaMK1的底物磷酸化活性检测 | 第102-103页 |
| 3 MgCaMK2的自身磷酸化活性检测 | 第103-106页 |
| 4 MgCaMK2的底物磷酸化活性检测 | 第106-107页 |
| 四 讨论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-110页 |
| 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
