| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 猪圆环病毒的研究进展 | 第8-16页 |
| ·病原学 | 第8-10页 |
| ·病原学历史 | 第8-9页 |
| ·病原的分类 | 第9页 |
| ·病毒理化特性及培养特性 | 第9-10页 |
| ·PCV分子生物学特性 | 第10-11页 |
| ·PCV的基因组结构 | 第10页 |
| ·PCV基因编码的蛋白及其特征 | 第10-11页 |
| ·流行病学 | 第11-12页 |
| ·猪圆环病毒的流行情况 | 第11-12页 |
| ·病毒传播方式及途径 | 第12页 |
| ·猪圆环病毒的致病机理 | 第12-14页 |
| ·诊断及防制 | 第14页 |
| ·诊断方法 | 第14页 |
| ·防制措施 | 第14页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第14-16页 |
| 2 猪圆环病毒2型河北地方株的分离鉴定 | 第16-31页 |
| ·材料与仪器 | 第16-18页 |
| ·细胞、载体、菌种、病料 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要试剂及溶液配置 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-25页 |
| ·病料的采集和处理 | 第19-20页 |
| ·病料的PCR检测 | 第20-21页 |
| ·PCV2病毒的分离 | 第21页 |
| ·分离病毒的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| ·PCV2全基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆株的序列分析 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-28页 |
| ·各猪场组织病料中PCV2的PCR检测结果 | 第25-26页 |
| ·分离毒全基因的PCR鉴定 | 第26页 |
| ·PCV2全基因组的纯化、连接与克隆 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切及PCR鉴定结果 | 第26-28页 |
| ·核苷酸序列测定结果及分析 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| ·病料的PCR检测 | 第28-29页 |
| ·细胞选择及病毒的分离 | 第29页 |
| ·PCV2分离株全基因组序列分析 | 第29-31页 |
| 3 PCV2河北分离株ORF2基因的克隆及原核表达 | 第31-43页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·质粒、菌株 | 第31页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·ORF2基因的PCR扩增 | 第33页 |
| ·ORF2基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·ORF2基因序列及其编码蛋白的预测分析 | 第34页 |
| ·ORF2基因重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·重组表达菌的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·Western-blotting检测表达产物 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-41页 |
| ·ORF2基因的扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒pMD19-T-ORF2鉴定 | 第37-38页 |
| ·ORF2基因氨基酸序列推导及其编码蛋白一级结构的分析 | 第38-39页 |
| ·表达基因片段的扩增 | 第39页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的特异性鉴定-Western-blotting分析 | 第40页 |
| ·表达条件的优化 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·PCV2 ORF2基因的扩增和克隆 | 第41-42页 |
| ·表达基因的改造与表达 | 第42页 |
| ·表达载体的选择 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 在读期间发表硕士论文 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
