| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-19页 |
| ·引言 | 第8页 |
| ·植物抗寒冻基因工程研究进展 | 第8-14页 |
| ·导入抗寒功能基因的研究 | 第9-12页 |
| ·导入抗寒调控基因的研究 | 第12-14页 |
| ·转录因子CBF研究进展 | 第14-18页 |
| ·CRT/DRE顺式作用元件的发现 | 第14页 |
| ·CBF基因的发现及其结构特点 | 第14-16页 |
| ·CBF基因的表达及对抗冻基因的调控 | 第16-17页 |
| ·CBF基因在植物抗寒中的作用 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第18-19页 |
| 2 山葡萄CBF3基因克隆及生物信息学分析 | 第19-38页 |
| ·试验材料 | 第19-21页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·菌种 | 第19页 |
| ·酶和生化试剂 | 第19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·试剂和培养基配方 | 第19-21页 |
| ·试验方法 | 第21-24页 |
| ·山葡萄叶片总RNA的提取 | 第21页 |
| ·山葡萄叶片总RNA RT-PCR扩增合成cDNA | 第21页 |
| ·cDNA的PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·CBF3基因克隆与测序 | 第22-23页 |
| ·CBF3基因生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-37页 |
| ·山葡萄叶片总RNA的提取 | 第24页 |
| ·山葡萄叶片总RNA的RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25页 |
| ·目的基因的测序结果及生物信息学分析 | 第25-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 3 山葡萄CBF3基因原核表达初步研究 | 第38-48页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·试验材料 | 第38-39页 |
| ·菌株和载体 | 第38页 |
| ·酶和试剂 | 第38页 |
| ·试剂配方 | 第38-39页 |
| ·试验方法 | 第39-41页 |
| ·质粒的提取 | 第39页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·载体质粒和目的基因的双酶切 | 第39-40页 |
| ·目的基因和pGEX-4T-2质粒酶切产物的连接 | 第40页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3) | 第40-41页 |
| ·转化子的鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-CBF3的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·诱导表达 | 第41页 |
| ·重组菌菌体的裂解 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE检测融合蛋白表达 | 第41-42页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·质粒提取 | 第43页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·原核表达载体和目的基因的双酶切 | 第44-45页 |
| ·重组表达载体的构建与检测 | 第45-46页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中融合表达 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 4 CBF3基因植物表达载体的构建 | 第48-55页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·菌种和质粒 | 第48页 |
| ·酶和生化试剂 | 第48页 |
| ·引物 | 第48页 |
| ·主要试剂的配制 | 第48页 |
| ·CBF3基因植物表达载体的构建 | 第48-50页 |
| ·中间表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·冻融法将中间表达载体导入根癌农杆菌 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·目的基因及pROK Ⅱ的双酶切 | 第51-52页 |
| ·中间表达载体的鉴定 | 第52-53页 |
| ·中间载体导入农杆菌的PCR鉴定 | 第53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录A 图版 | 第63-64页 |
| 附录B 测序结果 | 第64-72页 |
| 附录C CBF3基因原核表达载体构建流程图 | 第72-73页 |
| 附录D CBF3基因植物表达载体构建流程图 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |